Western Blotting由專業(yè)試劑供應(yīng)商北京百奧萊博提供，用于科研試驗(yàn)，我公司專注于免疫檢測產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和供應(yīng)，為您提供的Western Blotting質(zhì)量可靠，批間差小，且價(jià)格公道，熱切盼望您選購我們的產(chǎn)品。...

特別提示：包括Western Blotting DAB顯色法檢測試劑盒(藍(lán)色)(小鼠IgG)在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：Western Blotting DAB顯色法檢測試劑盒(藍(lán)色)(小鼠IgG)
英文名稱：DAB chromogenic reagent kit For Western Blotting
產(chǎn)品貨號：ZN1932
產(chǎn)品規(guī)格：1盒

工作原理：聚合標(biāo)記法是一種酶標(biāo)記方法，其敏感性比普通酶標(biāo)法有明顯提高。用于 Western Blotting的免疫學(xué)檢測，更能體現(xiàn)其優(yōu)點(diǎn)。不僅能大量地節(jié)約一抗，更重要的是使條帶更清晰，甚至能檢測出普通酶標(biāo)法無法檢測出的微量條帶。DAB 是過氧化物酶zuì重要的顯色劑之一，反應(yīng)產(chǎn)物為不溶于水、二甲苯和醇的棕色沉淀物，適合于免疫印跡的顯色反應(yīng)。本產(chǎn)品采用特殊配方，具有操作簡單，儲存穩(wěn)定，信號靈敏度高，持續(xù)時(shí)間長，背景低，結(jié)果易保存等優(yōu)點(diǎn)。
保存條件：－20℃冷凍保存。DAB 顯色試劑應(yīng)避光保存。
有效期：一年。
試劑盒的內(nèi)容：
(1)封閉試劑：10 g 蛋白干粉×1 包。
(2)濃縮抗體稀釋液：20 ml×1 瓶，為10倍濃縮液。
(3)過氧化物酶標(biāo)記山羊抗小鼠IgG，效價(jià) 1：200-400。
(4)DAB 顯色試劑，含
顯色劑 A：DAB×40倍濃縮液，3ml。
顯色劑 B：H2O2×40倍濃縮液，3ml。
顯色劑 C：×40倍 TBS 濃縮緩沖液(含氯化鎳)，3ml。
使用說明：
需要而未提供的試劑和器材：
1．轉(zhuǎn)印了蛋白樣品的NC 膜或PVDF 膜：通過 SDS-PAGE 凝膠電泳分離蛋白質(zhì)抗原，將 PAG 膠上的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印到硝酸纖維素膜(NC 膜)或PVDF 膜上。
2．稀釋緩沖液：使用中性稀釋緩沖液即 0.02 M PBS或0.02M TBS(AR0144)配制封閉液和抗體稀釋液。0.02 M PBS(pH7.2-7.6)：1000 ml 蒸餾水加 Na2HPO4 2.8 g ，NaH2PO4 0.4 g，NaCl 8.5 g。如果用的是含水磷酸鹽，應(yīng)加上分子式中水的含量。0.02M TBS(pH7.2-7.6)：1000ml 蒸餾水中加 Tris 2.42g,NaCl 9g; 純乙酸或濃鹽酸調(diào)節(jié) pH 值(7.2-7.6)。
3．洗滌緩沖液：每 1000ml 中性稀釋緩沖液中加入 0.5 ml Tween20 即可。
4．一抗：選擇適合的一抗，用抗體稀釋液稀釋相應(yīng)的一抗，一般特異性抗體工作濃度為1μg/ml,具體的稀釋度取決于特異性的一抗和膜上的抗原的量。
5．搖床：膜的封閉、抗體孵育和洗滌都需平穩(wěn)搖晃，需在搖床上操作。
6．相機(jī)：記錄結(jié)果。
操作程序：
1．通過聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白樣本和分子量標(biāo)準(zhǔn)。
2．將蛋白樣本轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜或PVDF 膜上。
3．封閉硝酸纖維膜：用封閉蛋白干粉 2 g,加稀釋緩沖液 100 ml，20-37℃封閉 1-2 小時(shí)。用量以浸沒整張膜為準(zhǔn)。
4．用洗滌緩沖液洗滌硝酸纖維素膜 5分鐘,1次。
5．配制抗體稀釋液：取 90 ml 稀釋緩沖液加 1 g 封閉蛋白干粉和 10 ml濃縮抗體稀釋液即可。一抗、二抗均用此稀釋液稀釋。
6．硝酸纖維膜孵育一抗：用抗體稀釋液稀釋相應(yīng)的一抗，一般特異性抗體濃度 1μg/ml,20-37℃孵育2 小時(shí)左右。如果缺乏特異性的條帶或陽性不強(qiáng)，應(yīng)提高一抗的濃度；如果有非特異性的條帶，應(yīng)提高一抗的稀釋度。
7．用洗滌緩沖液振蕩洗滌硝酸纖維素膜 3次,每次 5分鐘。
8．硝酸纖維膜孵育二抗：用抗體稀釋液稀釋相應(yīng)的酶標(biāo)二抗，效價(jià) 1：200-400。37℃孵育一個(gè)半小時(shí)左右。用戶可根據(jù)實(shí)際染色情況對稀釋度做適當(dāng)調(diào)整。
9．用洗滌緩沖液振蕩洗滌硝酸纖維膜 4次,每次 5分鐘。
10．DAB 顯色:使用 DAB 顯色試劑。按每 2 ml 蒸餾水加顯色劑 A，B，C 各１滴，混勻?；靹蚝蠹又聊ど稀Ｊ覝仫@色。一般顯色 1－30分鐘。
若無背景出現(xiàn)則可繼續(xù)顯色。顯色后用蒸餾水洗滌以終止反應(yīng)。
11．觀察，照相。
注意事項(xiàng)：
1．試劑頻繁使用時(shí)置４℃，不常使用時(shí)置－20℃。顯色劑 A 需置－20℃冷凍保存。如有結(jié)晶析出，應(yīng)確保結(jié)晶完全溶解再行使用。
2．顯色工作液應(yīng)新鮮配制。

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YT885 免疫染色洗滌液(10X) 100ml|10×100ml
SY0769 小鼠免疫組化(IHC)檢測試劑盒 150T
ZN1907 BSA TBS-T(含有0.05%Tween-20)緩沖系統(tǒng)封閉液 500ml
ZN1918 酪蛋白TBS緩沖系統(tǒng)封閉液 500ml
ZN1921 X光片背景去除液試劑盒 1盒
ZN1934 Western Blotting DAB顯色法檢測試劑盒(黃色)(大鼠IgG) 1盒
ZN1948 防脫片玻片(APES處理) 50片
ZN1962 濃縮型正常山羊血清 5ml

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名稱：BCIP/NBT堿性磷酸酯酶顯色試劑盒
貨號：YT078
規(guī)格：共100ml
本試劑盒是一種用于免疫組化顯色、Western等膜顯色和誘導(dǎo)多功能干細(xì)胞iPS鑒定等的試劑盒。

堿性磷酸酯酶常被稱作堿性磷酸酶(EC 3.1.3.1)，是一類水解酶，通過水解磷酸單酯將底物分子上的磷酸基團(tuán)除去，并生成磷酸根離子和自由的羥基，其去磷酸化作用的底物包括核苷酸、蛋白質(zhì)和生物堿等，并在堿性條件下zuì為有效。該酶是一組同功酶的統(tǒng)稱。常見的小牛腸堿性磷酸酶被廣泛用于二抗等的標(biāo)記zuì終用于蛋白和核酸等的檢測，也常用于DNA或RNA 5’和3’末端的去磷酸化(去單磷酸化)，特別是質(zhì)粒的5’末端去磷酸化以避免質(zhì)粒自連等。

BCIP/NBT是堿性磷酸酯酶的常用底物。在堿性磷酸酯酶的催化下，BCIP會被水解產(chǎn)生強(qiáng)反應(yīng)性的產(chǎn)物，該產(chǎn)物會和NBT發(fā)生反應(yīng)，形成不溶性的深藍(lán)色至藍(lán)紫色的NBT-formazan。

本試劑盒可以用于細(xì)胞或組織的堿性磷酸酯酶顯色包括誘導(dǎo)多功能干細(xì)胞iPS的鑒定，也可以用于Western等結(jié)合有堿性磷酸酯酶的膜的顯色檢測。同時(shí)也可以用于細(xì)胞或組織內(nèi)源性的堿性磷酸酯酶顯色。

試劑盒組份：
堿性磷酸酯酶顯色緩沖液————100ml
BCIP溶液(300X)————————350μl
NBT溶液(150X) ————————700μl

儲存條件：4℃，有效期一年。

名稱：Cy3抗兔免疫熒光染色試劑盒
貨號：YT107
規(guī)格：>300次
本試劑盒含有Cy3標(biāo)記的山羊抗兔IgG(H+L)抗體，可以用于檢測兔來源的相應(yīng)一抗，觀察到的顏色為非常鮮艷的紅色。Cy3是近年新開發(fā)的一種紅色熒光探針。它比大部分其它的紅色熒光探針更加明亮，更加不容易淬滅，而且背景更低。Cy3的吸收峰550nm、發(fā)射峰570nm。本試劑盒提供了含有熒光標(biāo)記抗體穩(wěn)定劑的免疫熒光染色二抗稀釋液，可以確保熒光標(biāo)記抗體稀釋后在4℃可以保存長達(dá)6個(gè)月，并且在6個(gè)月內(nèi)至少可以重復(fù)使用10次。本試劑盒含有抗熒光淬滅封片液，可以使熒光更加持久。本試劑盒對于六孔板內(nèi)的細(xì)胞樣品或常規(guī)切片，至少可以檢測300個(gè)樣品。

試劑盒組份：
抗兔Cy3————————————30μl
免疫熒光染色二抗稀釋液—————50ml
抗熒光淬滅封片液————————15ml

注意事項(xiàng)：
1. 需熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡。
2. 在使用抗熒光淬滅封片液的情況下可以減緩淬滅，但仍宜盡量避光，特別是需要盡量縮短在熒光顯微鏡下的觀察時(shí)間。
3. 熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，染色后宜盡快進(jìn)行熒光顯微鏡下的觀察。如果不能及時(shí)觀察可以4℃避光保存，但存放時(shí)間通常不宜超過一周，隨著存放時(shí)間的延長可能會導(dǎo)致觀察效果越來越差。
4. 免疫熒光染色效果的好壞和一抗的關(guān)系非常密切。建議選購有較多文獻(xiàn)報(bào)道的并注明可以用于免疫熒光染色的一抗用于本實(shí)驗(yàn)。
5. 如果觀察時(shí)發(fā)現(xiàn)熒光過弱，可以適當(dāng)提高一抗的濃度；如果熒光還是比較弱，可以適當(dāng)提高熒光標(biāo)記抗體的濃度。

儲存條件：-20℃，有效期一年。


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