北京百奧萊博供應的包涵體大量純化試劑盒用于科學研究，本產(chǎn)品質(zhì)量好，且具價格，深為用戶稱道，了解更多包涵體大量純化試劑盒等蛋白質(zhì)研究產(chǎn)品請聯(lián)系我司咨詢訂購。...

特別提示：包括包涵體大量純化試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：包涵體大量純化試劑盒
英文名稱：Inclusion Body Maxiprep Kit
產(chǎn)品貨號：BTN90510
產(chǎn)品規(guī)格：2次

本產(chǎn)品是包涵體微量純化試劑盒的大提升級產(chǎn)品，用于大量，快速的提取高質(zhì)量的包涵體。

產(chǎn)品特點：
1.大量提取，1次可處理多達5升的菌液，相當于50次中量提取。
2.適合制備級別的包涵體純化，需在50mL以上的離心管或離心瓶中完成。
3. 能有效去除包涵體中的細胞壁和細胞膜等非重組蛋白成份，使重組蛋白在包涵體中所占比重達到60%以上。
4. 即可以選擇高壓裂解法，也可以采用酶學裂解法裂解細菌。
5. 得到的包涵體可以用于重折疊，也可以用于凝膠層析和動物免疫。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
溶液A	100mL
溶液B	250mL×2
包涵體溶解液	100ml
溶菌酶	100mg
說明書	1份

儲存條件：常溫運輸，4℃保存(溶菌酶需要-20℃保存，包涵體溶解液可以室溫保存)，有效期一年。

自備試劑：如果得到的重組蛋白確有降解則需要自備蛋白酶抑制劑混合物(BTN80808)。

使用方法：

一．細胞沉淀：
1．轉(zhuǎn)移1-5升菌液到干凈的、預稱重量的塑料離心瓶中。如果離心瓶體積不夠大，可以分多次反復離心收集。
2．5000g(相當于Sorvall GSA轉(zhuǎn)頭5500rpm)4℃離心15-30分鐘，小心棄上清。
3．復稱重量，差值就是細菌的濕重。1升的過夜培養(yǎng)的大腸桿菌濕重一般為3克，所以1-5升菌液一般能得到3-15克細菌。注意：后續(xù)操作的很多溶液都是按此步得到得細胞濕重添加。
4．細胞沉淀可以立即使用或存放在-80℃待用。

二．細胞裂解(下面兩法中選其一)：
 高壓破碎法(French Press)+超聲法(推薦方法)
1．按每克細菌濕重加入3mL溶液A重懸細胞，可以用玻璃棒攪拌或用Waring搗碎機勻漿(如果細菌濕重超過10克)使細菌懸浮，直到檢測不到成塊的細胞為止。如有必要，可以加入溶菌酶干粉，使其終濃度為0.2mg/mL。
2．讓細胞通過壓力為16000-18000 lb/in2的高壓細胞破碎儀，收集的細胞裂解液需放冰上。
3．重復上步操作一次或多次，直到大部分細菌都被裂解。注意：每次處理后zuì好在顯微鏡下檢查細菌裂解的比例。
4．將細胞裂解液置于冰浴中，用超聲破碎儀滿功率下超聲處理5分鐘，工作狀態(tài)為50%(開0.5秒，關(guān)0.5秒)。此過程中zuì好將細胞裂解液放冰上并用磁力攪拌器攪拌，否則產(chǎn)生的熱量會使包涵體蛋白變性，在純化中丟失。
 酶法+超聲法(在沒有高壓破碎儀器時選方法)
1．按每克細菌濕重加入3mL的含溶菌酶的溶液A重懸細胞，可以用玻璃棒攪拌細菌沉淀使之懸浮。
2．在細菌懸浮液中加入溶菌酶干粉，使其終濃度為0.2mg/mL，攪拌混勻后37℃放置30分鐘裂解細菌，其間不時需要用玻璃棒混勻。細菌釋放出的DNA將使裂解物變得十分粘稠。如果不粘稠，說明裂解不充分，需要繼續(xù)裂解，否則完整細菌將和包涵體一起沉淀，影響包涵體的純度。由于處理量大，zuì好在顯微鏡下檢查細菌是否充分裂解。
3．將細胞裂解液置于冰浴中，用超聲破碎儀滿功率下超聲處理5分鐘，工作狀態(tài)為50%(開0.5秒，關(guān)0.5秒)。此過程中zuì好將細胞裂解液放冰上并用磁力攪拌器攪拌，否則產(chǎn)生的熱量會使包涵體蛋白變性，在純化中丟失。

三．包涵體純化：
1．將超聲處理的細胞裂解液轉(zhuǎn)移到離心瓶中，22000g 4℃下高速離心60分鐘(注意：轉(zhuǎn)子不同其對應的離心速度不同)，小心收集上清。上清含有以可溶形式存在的重組蛋白，可以保留作為SDS-PAGE對照樣品。
2. 將沉淀(主要由包涵體構(gòu)成)懸浮在預冷的溶液B中。每克細菌需要5mL溶液B，1升細菌的濕重約3克，大約需要15mL溶液B，用玻璃棒或勻漿器攪拌混勻后室溫放置5分鐘。
3．22000g 4℃下高速離心30分鐘，沉淀將出現(xiàn)三層，zuì下面的是未徹底破裂的細胞碎片，其上是包涵體，zuì上層的松軟沉淀是細胞壁和細胞外膜。如果處理過程中使用過溶菌酶，則此層較薄。小心收集上清，可以作為包涵體次洗滌的對照樣品。
4．重復第8-第9步直到上清變清和zuì上層細胞壁和細胞外膜松軟沉淀消失，此過程一般需要重復洗滌2次(共3次洗滌)，小心收集上清作為包涵體第二次洗滌和第三次洗滌的對照樣品。本試劑盒提供的溶液B足夠一次5升規(guī)模的提取洗3次，如需更多溶液B請單獨購買。
5．上步得到的沉淀即為包涵體，其中重組蛋白一般占60%重量，其余40%為其他蛋白質(zhì)。此沉淀可以長期放置在-80℃冰箱待用，也可以直接用于免疫動物制備抗體，還可以直接進入下面得包涵體的溶解步驟。
6．估計重組蛋白的產(chǎn)率：先需要通過預實驗知道重組蛋白的表達水品，如果表達水平為1%，則1克濕重的細菌中將含有1mg重組蛋白質(zhì)。此法得到的重組蛋白質(zhì)的回收率一般在75%，即1mg重組蛋白質(zhì)能得到0.75mg，丟失0.25mg。

四．包涵體的溶解：
1．在室溫下，將包涵體溶解液加入到包涵體沉淀中，用槍頭充分吹打后漩渦震蕩。如果需要將溶解的包涵體直接用于凝膠過濾層析進一步純化，則按每克原始細胞濕重加入1mL包涵體溶解液，重組蛋白的濃度約為4-5mg/mL；如果需要將溶解的包涵體直接用于蛋白質(zhì)折疊，則按每克原始細胞濕重加入3mL包涵體溶解液，重組蛋白的濃度約為1-2mg/mL；注意：包涵體溶解液低溫放置會產(chǎn)生沉淀，必須45-65℃溶化并混勻后才能使用。
2．室溫放置1小時使蛋白質(zhì)充分溶解。
3．100,000g 4℃離心60分鐘(轉(zhuǎn)速需要根據(jù)離心機轉(zhuǎn)子的大小換算)，小心收集上清，保留不溶性沉淀。注意：檢查離心管能否承受此離心力。SDS-PAGE檢查是否大部分重組蛋白都在上清中。如果沒有，說明包涵體沒有完全溶解，需要用適當增加包涵體溶解液的用量。
4．將上清(溶解的包涵體)分成10-20mL一份，放于塑料離心管中(不要超過離心管容量的70%)置-80℃長期保存或直接用于復性等試驗。由于不同的蛋白質(zhì)有不同的zuì佳復性條件，需要用戶自己摸索。包涵體純化過程中引入了溶菌酶，在SDS-PAGE分析時可能有額外條帶出現(xiàn)。

根據(jù)您的關(guān)注的包涵體大量純化試劑盒，您可能還對以下產(chǎn)品有需求：



名稱：牛血清γ球蛋白標準品(2mg/mL)
貨號：BTN131071
規(guī)格：1mL
牛血清γ球蛋白標準品(BGG)經(jīng)過濾除菌，質(zhì)量穩(wěn)定。本產(chǎn)品是考馬斯(Bradford)分析實驗的理想標準品，是使用任何方法測定抗體濃度的理想標準品。本產(chǎn)品濃度為2mg/mL。本品僅用于科研實驗，不能用作醫(yī)療及臨床診斷。

儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

自備試劑：0.9% NaCl溶液或PBS緩沖液、BCA工作液。

使用方法：
本產(chǎn)品可應用于蛋白分析定量(BCA蛋白分析、考馬斯-Bradford分析等)、抗體脫鹽回收或其他層析操作的對照、SDS-PAGE電泳和分光光度計紫外燈的常規(guī)校準(吸收峰在280nm)等實驗。由于蛋白操作彼此差別太大，本手冊只列出此產(chǎn)品用于BCA蛋白分析的實驗流程，其他流程不在此詳述。

1．標準品溶液的稀釋方法見下表。此標準品溶液的稀釋可使用去離子水、0.9% NaCl或PBS。

2mg/mL本品(μL)	稀釋液(μL)	稀釋后產(chǎn)品終濃度(μg/mL)
120	0	2000
90	30	1500
60	60	1000
45	75	750
30	90	500
15	105	250
10	110	125
0	120	0(空白對照)

2．本產(chǎn)品標準曲線的制備
1)分別取50μL稀釋后的本標準品溶液加入到1.5mL離心管中，每個濃度取2個平行樣。
2)在每管中各加入1mL工作液后，立即混勻。
3)37℃水浴槽中反應30分鐘后，冷卻至室溫。
4)使用分光光度計測定562nm處的吸光度值。測定時，使用1mL比色皿，用水校零。盡可能在20分鐘內(nèi)檢測完畢所有樣品。
5)各濃度本標準品溶液的吸光度值減去空白對照的平均值，繪制本標準品溶液的標準曲線。
3．檢測樣品的測定
 檢測樣品建議與本標準品溶液同時進行測定，測定方法同上，與本標準品的測定方法一致。如果必要也可選擇與本標準品溶液相同的稀釋方法稀釋檢測樣品后測定。


關(guān)注包涵體大量純化試劑盒，的同時，為您推薦更多您可能感興趣的產(chǎn)品：

貨號	名稱	規(guī)格
BTN61205	血清白蛋白清除劑	15次
SNM472	DAPI染色液	50ml
ALH379	蛋白染色試劑盒(替代考馬斯亮藍染色)	20次|60次
ALH381	加熱型考馬斯亮蘭快速染色液	500ml|2000ml
RFT064	30％丙稀酰胺溶液(19:1)	100ml
KFS079	5×SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(50%甘油)	1ml
KFS225	細胞色素C蛋白檢測試劑盒	50T

如果您覺得“BTN90510 包涵體大量純化試劑盒”描述資料不夠齊全，請聯(lián)系我們獲取詳細資料。(聯(lián)系時請告訴我從給覽網(wǎng)看到的，我們將給您最大優(yōu)惠！)
本頁鏈接：http://18bearing.com/com_bjbiolab01/sell/itemid-8543257.html
已經(jīng)有850位訪客查看了本頁.