細胞周期檢測試劑盒的品牌是百奧萊博，是優(yōu)質(zhì)的細胞凋亡與增殖產(chǎn)品，本制品用于科研目的，本品質(zhì)量穩(wěn)定，價位合理，需要細胞周期檢測試劑盒等細胞凋亡與增殖產(chǎn)品的客戶，請到我公司官網(wǎng)聯(lián)系我們。...

特別提示：包括細胞周期檢測試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：細胞周期檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號：HR0408
產(chǎn)品規(guī)格：20T|50T|100T

細胞周期(cell cycle)是指細胞從前一次分裂結(jié)束起到下一次分裂結(jié)束為止的活動過程，通常由G0/G1 期、S 期、G2 期和M 期組成。G1 期：細胞開始RNA和蛋白質(zhì)的合成，但DNA含量仍保持二倍體。S 期：DNA 開始合成，這時細胞核內(nèi)DNA的含量介于G1 期和G2 期之間。當(dāng)DNA 復(fù)制結(jié)束成為4倍體時，細胞進入G2 期。G2 期的細胞繼續(xù)合成RNA及蛋白質(zhì)，直到進入M 期。因此，單純從DNA含量無法區(qū)分G2 期和M 期。一旦有絲分裂發(fā)生，細胞分裂成兩個細胞，這兩個細胞或者進入下一個細胞周期，或者進入靜止期(G0期)，而G0 期從DNA含量上同樣無法與G1 期區(qū)分。因此，整個復(fù)制周期可以描述為G0/G1、S、G2/M 期。通過核酸染料PI標記DNA,并由流式細胞儀進行分析，可以得到細胞各個時期的分布狀態(tài)，計算出G0/G1%、S%、G2/M%，了解增殖能力，在腫瘤病理學(xué)研究中，通常以S 期細胞比率作為判斷腫瘤增殖狀態(tài)的指標。
PI 為插入性核酸熒光染料，能選擇性的嵌入核酸DNA和RNA 雙鏈螺旋的堿基之間與之結(jié)合，其結(jié)合的量與DNA的含量成正比例關(guān)系，用流式細胞儀進行分析，就可以得到細胞周期各個階段的DNA分布狀態(tài)，從而計算出各個期的百分含量。PI染色后，假設(shè)G0/G1期細胞的熒光強度為1，那么含有雙份基因組DNA的G2/M 期細胞的熒光強度的理論值為2，正在進行DNA 復(fù)制的S 期細胞的熒光強度為1-2 之間。
細胞周期檢測試劑盒是利用細胞內(nèi)DNA 能夠和熒光染料結(jié)合的特性，細胞各個時期其DNA含量不同從而結(jié)合的熒光染料不同，流式細胞儀檢測的熒光強度也不一樣來檢測細胞周期。

儲存條件：-20℃避光保存。
有效期：一年。

注意事項：
1．細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。
2．固定時在振蕩器上輕輕振蕩細胞，并緩慢滴加75%乙醇，直接加入會導(dǎo)致細胞團聚的現(xiàn)象，很難重懸成單細胞。或者先用冷PBS 懸浮細胞，充分懸浮，使細胞充分分散成單細胞。之后緩慢加入無水乙醇，終濃度為70-75%乙醇。乙醇固定之后須無細胞沉淀。
3．為防止不同批次細胞在實驗時本身所出周期不同導(dǎo)致重復(fù)性差，可以在實驗前進行細胞的同步化處理，減少批間差異。實驗細胞應(yīng)處于對數(shù)生長期，不能是完全長滿，一般在50～80%比較好。
4．分析的時候需要的是單個的細胞，400 目篩網(wǎng)過濾是用來將粘在一起的細胞團濾掉，否則會出現(xiàn)人為的多倍體干擾，不過如果經(jīng)驗豐富的操作人員也可以gate掉。如果沒有條件過濾，請在染色之前將細胞彈的很散，再進行染色。
5．組織處理方法：用剪刀將組織剪成小塊，用 0.25%胰酶消化30min－1h，200－400目篩網(wǎng)過濾細胞，獲得單細胞懸液。如組織難以消化，可加入適量膠原酶。

試劑盒以外自備試劑和儀器：
● PBS ● 純水● 移液器及吸頭 ● 流式細胞儀

使用方法：

使用注意事項：
● 細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。
● zuì好使用含EDTA的細胞消化液。
● 洗滌細胞離心轉(zhuǎn)速不可超過800g。
● 乙醇固定時離心大概采用2000g力5分鐘，離心力太小可能部分細胞難以沉淀。

1．收集樣本細胞，細胞數(shù)量在1-5×106個。
2．用冷PBS 洗滌細胞兩次。
【注】：800g左右，離心5分鐘，小心吸取上清，避免吸走細胞。
3．70%-75%冰凍乙醇-20℃固定1小時或4℃固定過夜。
【注】：輕輕吹打混勻，避免細胞成團；不能太劇烈，防止細胞損傷成碎片。
到此步可以存放，-20℃保存樣品，1周內(nèi)樣品檢測不受影響。
4．用冷PBS 洗滌細胞一次。
5．用200-500μl冷PBS重懸細胞。
6．加入Rnase A溶液20μl 37℃水浴30分鐘。
7．400 目篩網(wǎng)過濾。
【注】：無細胞篩網(wǎng)可以不做此步驟。
8．加入400μl PI染液，輕輕混勻后4℃避光孵育30分鐘-1小時。
【注】：染色完成后宜在24h內(nèi)完成流式檢測。
9．流式檢測結(jié)果。激發(fā)波長為488nm。采用適當(dāng)分析軟件進行細胞DNA含量分析和光散射分析。

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貨號	名稱	規(guī)格
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SNM518	DNA ladder 3000	60T

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