SY0495 DAPI雙鏈DNA染料

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特別提示:包括DAPI雙鏈DNA染料在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱:DAPI雙鏈DNA染料
英文名稱:DAPI dihydrochloride
產(chǎn)品貨號(hào):SY0495
產(chǎn)品規(guī)格:10mg
DAPI,也稱DAPI dihydrochloride,是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料,和雙鏈DNA結(jié)合后可以產(chǎn)生比DAPI自身強(qiáng)20多倍的熒光。和EB(ethidium bromide)相比,對(duì)雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍。因?yàn)镈API是含有特定AT序列DNA的一種嵌入劑,它能像Hoechst染料一樣粘附在DNA雙螺旋的小溝區(qū)。盡管DAPI不能通過活細(xì)胞膜,但卻能穿透擾亂的細(xì)胞膜而對(duì)核染色。DAPI具有很高的光漂白承受水平,能用來檢測(cè)酵母線粒體DNA,葉綠體DNA,病毒DNA,microplasm DNA以及染色體DNA。DAPI-DNA復(fù)合物的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為360nm和460nm。
DAPI染色常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè),染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。DAPI也常用于普通的細(xì)胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色。推薦工作濃度為0.5-10μg/ml。
CAS:28718-90-3
分子式:C16H17Cl2N5
分子量:350.25
純度:>90% (from N)
注意事項(xiàng)
1)DAPI對(duì)人體有一定刺激性,請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。
2)熒光染料都存在淬滅的問題,建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測(cè)。
3)為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。
4)為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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規(guī)格:100T|50T
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貨號(hào):KFS206
規(guī)格:20T|50T|100T
本試劑盒適用于培養(yǎng)細(xì)胞及新鮮組織caspase-9 檢測(cè)。Caspase 家族在介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的過程中起著非常重要的作用。Caspase-9 是級(jí)聯(lián)酶的上游分子,可被線粒體向細(xì)胞質(zhì)釋放的細(xì)胞色素C 激活。激活的Caspase-9 可引起下游級(jí)聯(lián)酶的活性,如Caspase-3。Caspase-9 在正常狀態(tài)下以酶原的形式存在于胞漿中,沒有活性;但在細(xì)胞發(fā)生凋亡階段時(shí)則被激活。Caspase-9 分光光度法檢測(cè)試劑盒就是將caspase-9 序列特異性的多肽偶聯(lián)至發(fā)色基團(tuán),當(dāng)該底物被caspase-9 剪切后,發(fā)色基團(tuán)即游離出來,可通過酶標(biāo)儀或分光光度計(jì)(λ=405nm 或400nm)測(cè)定其吸光值,可考察caspase-9 的活化程度。
注意事項(xiàng)
1. Caspase-9 Substrate 避光保存及使用。
2. 對(duì)某些凋亡誘導(dǎo)劑引起的細(xì)胞凋亡可能存在非依賴于Caspase-9 活化的機(jī)制,這種情況時(shí)利用本試劑盒檢測(cè)Caspase-9 活性無明顯改變,需要考慮凋亡機(jī)制中的其他信號(hào)通路。
3. 細(xì)胞數(shù)量需達(dá)到3~5×106 個(gè)或新鮮組織50-100mg,以便能達(dá)到測(cè)定需要的100~200μg 蛋白的要求,因?yàn)镃aspase-9 的活性與細(xì)胞裂解液的蛋白含量有關(guān),如測(cè)定的OD 值偏低,可通過增加細(xì)胞數(shù)量或組織量的方法來提高蛋白量。
名稱:XTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑
貨號(hào):KFS317
規(guī)格:500T|1000T
XTT(二甲氧唑黃)是一種類似于MTT 的化合物,在電子耦合試劑存在的情況下,活細(xì)胞線粒體中存在與輔酶Ⅱ相關(guān)的脫氫酶,可將黃色的XTT 還原成水溶性的橘黃色的甲臜。生成的甲月贊能夠溶解在組織培養(yǎng)基中,不形成顆粒,可直接用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀檢測(cè)定吸光值。
注意事項(xiàng)
1. 本試劑盒的檢測(cè)依賴于脫氫酶催化的反應(yīng),如果待檢測(cè)體系中存在較多的還原劑,例如一些抗氧化劑會(huì)干擾檢測(cè),需設(shè)法去除。
2. 如果待測(cè)溶液有還原性,測(cè)定不含細(xì)胞,但含有XTT 的待測(cè)溶液在450 nm 處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入XTT,如果吸光度相對(duì)較大,則需要除去培養(yǎng)基,并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的100 μl 培養(yǎng)基和50 μl XTT 工作液進(jìn)行檢測(cè)。
3. 用酶標(biāo)儀檢測(cè)前請(qǐng)確??變?nèi)沒有氣泡,否則會(huì)干擾測(cè)定。
4. 為保證您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
操作方法
1. 96 孔板加入細(xì)胞100μL/孔(約1×104),置37℃ 5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 小時(shí)。2.加入適當(dāng)濃度的受試化合物。3.將96 孔板在37℃,含5% CO2 空氣及濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4. 向各孔中加入50 μl 的XTT 檢測(cè)工作液。
5. 37℃下孵育1~4 小時(shí)。
6. 酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度。
結(jié)果分析
1. 細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(完全培養(yǎng)基加XTT 工作液,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(完全培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加XTT 工作液,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
2. 求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)。
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