Caspase 3活性檢測試劑盒由北京百奧萊博供貨并提供相關技術服務支持，本品用于生化實驗研究等領域，本品質(zhì)量穩(wěn)定，價位合理，需要Caspase 3活性檢測試劑盒等細胞凋亡與增殖產(chǎn)品的客戶，請到我公司官網(wǎng)聯(lián)系我們。...

特別提示：包括Caspase 3活性檢測試劑盒-熒光在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：Caspase 3活性檢測試劑盒-熒光
產(chǎn)品貨號：HR8275
產(chǎn)品規(guī)格：50T|100T

Caspase-3活性檢測試劑盒(Caspase 3 Activity Assay Kit)是采用熒光法檢測細胞或組織裂解液中Caspase 3酶活性或純化的Caspase 3酶活性的試劑盒。
本Caspase 3活性檢測試劑盒是基于casepase 3可以催化Caspase-3熒光底物產(chǎn)生綠色熒光產(chǎn)物AFC，AFC在400nm激發(fā)，發(fā)射波長505nm。生成的AFC 量與caspase 3的活性成正比，從而可以通過測定熒光強度來檢測caspase 3的活性。
Caspase(Cysteine-requiring Aspartate Protease)是一個在細胞凋亡過程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase 3 也稱CPP32、Yama或apopain，有時被寫作caspase-3或caspase3，屬于caspase 家族的CED-3 亞家族(CED-3 subfamily)，是細胞凋亡過程中的一個關鍵酶。Caspase 3 是哺乳動物細胞中研究zuì多的一個caspase。Caspase-3在正常狀態(tài)下以酶原的形式存在于胞漿中，沒有活性；但在細胞發(fā)生凋亡階段，Caspase-3被激活，活化的Caspase-3 由兩個大亞基和兩個小亞基組成，裂解相應的胞漿胞核底物，zuì終導致細胞凋亡。Caspase 3可以剪切procaspase 3、6、7和9，并可以直接特異性剪切許多caspase底物，包括PARP，ICAD，gelsolin和fodrin等。這些由caspase 3 介導的蛋白剪切是細胞凋亡分子機制的重要組成部分。另外，caspase 3在細胞核凋亡過程中也起到了關鍵作用，包括染色質(zhì)固縮，DNA 片段化等。同時caspase 3對細胞起泡也起到關鍵作用。
本試劑盒可用于培養(yǎng)細胞或新鮮組織樣本的caspase-3檢測。
我公司還可以提供R110，AMC等熒光標記的Caspase-3活性檢測試劑盒。沒有熒光檢測條件，可以選擇我公司的比色法Caspase-3活性檢測試劑盒(相關產(chǎn)品HR0424)。

儲存條件：裂解液、檢測液2-8℃保存；底物、DTT -20℃保存。
有效期：一年。

※ ※ ※ 使用前請仔細閱讀產(chǎn)品說明書 ※ ※ ※
使用限制：本試劑盒僅供科學研究使用，不可用于診斷或治療。
產(chǎn)品更新：我公司會更新或升級產(chǎn)品，以優(yōu)化和增強其使用性能，產(chǎn)品說明書會進行相應的版本更新。使用產(chǎn)品時，請參照隨產(chǎn)品附帶的說明書，不要參照網(wǎng)上下載的說明書，可能是不同的版本。需要zuì新電子版說明書時可以在收到產(chǎn)品后發(fā)郵件索取。
使用安全：使用時需要合適的實驗室外套，一次性手套。避免皮膚或粘膜與試劑接觸。如果試劑不小心接觸皮膚或眼睛，應立即用水沖洗。

注意事項：
● 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。
● 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。
● 樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。
● zuì好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并徹底清除殘留清潔劑。
● 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規(guī)定程序處理。

使用方法：

注意事項：
● 變化不明顯，可以適當延長反應時間。
● 樣品適合采用Bradford法進行蛋白濃度測定。
● 如果樣品中蛋白含量低，裂解樣品時需設法使樣品中的蛋白濃度在10mg/ml以上。
● 如果樣品中激活的caspase水平很低，適當調(diào)節(jié)誘導細胞凋亡的時間，找一個caspase激活比較強的時間點進行檢測。
● Caspase-3底物避光保存，使用過程中盡量避光。
● 底物為DMSO溶液，冬季氣溫較低時在室溫時為凝固狀態(tài)，易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱溶解，吸頭也需要放在培養(yǎng)箱預熱，否者容易再次凝固在吸頭內(nèi)壁產(chǎn)生損耗。
● 使用前，先將本品取出回溫至室溫，并對其進行簡短離心使DMSO溶液集中于管底。
一、裂解緩沖液和檢測緩沖液配制
根據(jù)待測樣品數(shù)準備裂解緩沖液和檢測緩沖液，每1ml緩沖液中加入10μl DTT。充分混勻置冰上備用。
二、樣品處理
A、細胞樣品
1．收集5×106個細胞，在4℃，500×g條件下離心5分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細胞。
2．用冷PBS洗滌細胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
3．在細胞中加入50μl冷的裂解緩沖液，高速渦旋振蕩15秒。
4．置冰上持續(xù)振蕩15分鐘。
【注】：
● 不同細胞樣本需要的時間不一樣，如果后續(xù)離心有較多沉淀，延長裂解時間，至無明顯細胞沉淀為止。
5．在4℃，12000×g條件下離心15分鐘。
6．快速將上清吸入另一預冷的干凈離心管，置于冰上保存?zhèn)溆谩?br /> B、組織樣品
1．取適量組織樣本剪碎，按照每1mg/50μl冷的裂解緩沖液，用組織勻漿器勻漿至無明顯肉眼可見固體(或用液氮研磨)，冰上靜置15分鐘，小心將上清吸入另一預冷的干凈離心管。
【注】：
●裂解液加組織量的大約3倍體積即可。
2．在4℃，12000×g條件下離心5分鐘。
3．快速將上清吸入另一預冷的干凈離心管，置于冰上或-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br /> 三、對上述處理過的上清用Bradford 法進行蛋白定量。
【注】：
● 必須進行蛋白定量，以保證后續(xù)步驟的蛋白上樣量足夠，否則容易出現(xiàn)檢測不到結果的情況。
四、Caspase 3活性檢測
1．取50μl裂解上清，加入50μl檢測緩沖液。
2．再加入10μl caspase-3熒光底物，充分混勻，在37℃下避光反應1-2小時。
【注】：
● Caspase-3 水平較低時需要延長反應時間。
3．熒光酶標儀檢測。Ex=400nm，Em=505nm。
常見問題分析：
趨勢不明顯，無結果，無法顯示與對照組細胞的差異等，其可能的原因主要集中在以下幾個方面：
1．樣品上樣量不夠：本方法檢測需要的細胞數(shù)量須在3×106以上，或者新鮮組織50mg
以上，每次反應的蛋白量需要在100μg以上。如果量不夠，請增加細胞或組織的量。
2．樣本不新鮮：使用新鮮的細胞或組織樣本。
3．樣品裂解不夠充分：細胞或組織需要進行充分裂解，zuì好可以加入適當?shù)牡鞍酌敢种苿┗旌衔锪呀?，裂解后應無明顯大量的沉淀，以保證有效獲得蛋白。
4．樣品中激活的caspase-3水平偏低：先確認模型的凋亡現(xiàn)象是否明顯，以及根據(jù)文獻和其他驗證方法確認該凋亡是否激活caspase-3。
5．檢測時間點的選擇是否合適：不論哪種通路的凋亡，需要在caspase-3被有效激活并達到相應活化程度后的一定時間范圍內(nèi)檢測，過早或過晚均不合適。
6．不適合本方法檢測：某些凋亡誘導劑誘導的凋亡可能是非依賴于caspase-3活化的機制，此種情況時利用本試劑盒檢測caspase-3無明顯變化，需要考慮凋亡機制的其他通路。

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貨號	名稱	規(guī)格
YT138	Caspase 1 活性檢測試劑盒	20次|100次
YT139	Caspase 2 活性檢測試劑盒	20次|100次
YT140	Caspase 3 活性檢測試劑盒	20次|100次
YT898	碘化丙啶	5mg|20mg
KFS208	Caspase3/7活細胞熒光實時法檢測試劑盒	100T|50T
KFS213	細胞凋亡線粒體膜電位檢測試劑盒(JC-10)	10T|20T|50T|100T

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名稱：Caspase 8 活性檢測試劑盒
貨號：YT143
規(guī)格：20次|100次
本試劑盒是采用分光光度法檢測細胞或組織裂解液中caspase 8酶活性或純化的caspase 8酶活性的試劑盒。本試劑盒用酶標儀檢測或容量不超過100μl的分光光度檢測杯檢測時，除標準曲線外可以檢測20個樣品。

Caspase是一個在細胞凋亡過程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase 8也稱FLICE、MACH或Mch5，有時被寫作caspase-8或caspase 8，通常以酶原的形式存在，在細胞凋亡的信號轉(zhuǎn)導過程中被激活。Caspase 8被認為是細胞凋亡信號轉(zhuǎn)導過程中比較上游的一個caspase。在Fas-receptor和TNFR-1介導的細胞凋亡過程中caspase 8被激活，形成一個由p18和p10組成的二聚體，進一步激活下游的caspase 4，caspase 6，caspase 9和caspase 10。

本Caspase 8活性檢測試劑盒是基于caspase 8可以催化底物Ac-IETD-pNA(acetyl-Ile-Glu-Thr-Aspp-nitroanilide)產(chǎn)生黃色的pNA(p-nitroaniline)，從而可以通過測定吸光度來檢測Caspase 8的活性。pNA在405nm附近有強吸收。

試劑盒中提供了caspase 8催化產(chǎn)生的黃色產(chǎn)物pNA，可以作為定量caspase 8酶活性的標準品。

試劑盒組分：
裂解液——————8ml
檢測緩沖液——————8ml
Ac-IETD-pNA(2mM)———200μl
pNA(10mM)——————200μl

注意事項：
1. 須自備可以測定A405或A400的酶標儀或容量不超過100μl的分光光度檢測杯及相應分光光度計。優(yōu)先考慮測定A405，如有困難可以測定A400。
2. Ac-IETD-pNA需盡量避免反復凍融，請注意適當分裝。
3. 測定蛋白濃度需Bradford蛋白濃度測定試劑盒(YT034)，可向百奧萊博訂購。建議樣品用水稀釋1倍后再用Bradford法測定蛋白濃度，以降低DTT對蛋白濃度測定的干擾。
4. pNA(中文名為4-硝基苯胺)有毒，請注意小心防護。pNA(10mM)在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內(nèi)，可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。
5. 本試劑盒的裂解液可以和百奧萊博的其它caspase活性檢測試劑盒的裂解液通用，即本試劑盒裂解液制備的蛋白樣品可以用于百奧萊博其它caspase活性檢測試劑盒的檢測。

儲存條件：-20℃。

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