HR8632-500μL 細(xì)胞質(zhì)染色試劑CDCFDA
- 產(chǎn)品/服務(wù)：HR8632-500μL 細(xì)胞質(zhì)染色試劑CDCFDA
- 型 號(hào)：HR8632-500μL
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價(jià)：面議
- 更新日期：2023-05-31
- 有效期至：長(zhǎng)期有效
- 瀏覽次數(shù)：887
CDCFDA的膜轉(zhuǎn)運(yùn)和細(xì)胞內(nèi)水解的精確動(dòng)力學(xué)與細(xì)胞功能有關(guān)，因此CDCFDA標(biāo)記可用于通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)或熒光顯微鏡監(jiān)測(cè)細(xì)胞。CDCFDA染料標(biāo)記細(xì)胞的熒光強(qiáng)度在細(xì)胞系之間差異很大，可能是由于細(xì)胞內(nèi)酯酶活性的差異導(dǎo)致。...
檢測(cè)方法：
● 流式細(xì)胞儀 ● 熒光顯微鏡 ● 激光共聚焦
樣本類(lèi)型：
● 懸浮細(xì)胞 ● 貼壁細(xì)胞
試劑盒以外自備試劑和儀器：
● 流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡或激光共聚焦 ● 離心機(jī) ● PBS緩沖液 ● HBSS(無(wú)酚紅)
使用注意事項(xiàng)：
● 旋帽離心管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)液體灑落。
● 染色濃度根據(jù)細(xì)胞種類(lèi)的不同和每孔內(nèi)細(xì)胞數(shù)量的多少而異。
● CDCFDA母液易水解，建議分裝保存，分裝后用封口膜密封管口，再用錫箔紙包裹，最后和干燥劑一起用塑料袋密封，≦-20℃冷凍保存。
● CDCFDA工作液應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用，不能提前配制，因?yàn)镃DCFDA吸水會(huì)分解，影響染色效果。
● CDCFDA易被水解，在水溶液中會(huì)變質(zhì)。母液請(qǐng)?jiān)谑褂眠^(guò)程中避免接觸水。工作液在標(biāo)記細(xì)胞的過(guò)程中和水接觸是在許可的時(shí)間范圍內(nèi)的。
● CDCFDA溶解液在4℃、冰浴等較低溫度情況下會(huì)凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內(nèi)，可以37℃水浴片刻至全部融解后使用。
● CDCFDA標(biāo)記細(xì)胞僅需5-15分鐘即可完成。對(duì)于不同細(xì)胞，最佳標(biāo)記時(shí)間需自行摸索。正式實(shí)驗(yàn)前，建議先做幾個(gè)孔摸索染色濃度和加入CDCFDA試劑后的培養(yǎng)時(shí)間。
● 熒光染料均存在淬滅問(wèn)題，請(qǐng)盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。
● 以下染色步驟僅供參考。以實(shí)際需要使用。也可以原位染色。
使用方法：
1、根據(jù)需要檢測(cè)的細(xì)胞樣品數(shù)，用HBSS緩沖液將CDCFDA母液500-4000倍稀釋。
不同的細(xì)胞需要根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定最佳染色濃度。如果熒光強(qiáng)度弱，可以適當(dāng)提高CDCFDA的終濃度。如果背景太高，可以適當(dāng)降低CDCFDA的終濃度，請(qǐng)摸索條件找到最佳濃度。
【注】：
● 也可以用PBS 等緩沖液或相應(yīng)的無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋染料母液至所需濃度。
● 開(kāi)始實(shí)驗(yàn)前，使用HBSS 緩沖液或無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋CDCFDA到需要的工作濃度。工作濃度為根據(jù)不同細(xì)胞的預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定的最佳工作濃度，一般染色終濃度500-4000倍稀釋。
● 一般起始濃度按500-1000倍稀釋即可。
● 為了降低過(guò)度加載染料導(dǎo)致的潛在背景和細(xì)胞毒性，在不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的前提下應(yīng)盡可能低濃度染色。
● 工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。
2、將待測(cè)細(xì)胞用染色工作液重懸，至細(xì)胞濃度大約107/mL。
【注】：
● 貼壁細(xì)胞也可原位染色。
3、在37℃培養(yǎng)箱中避光孵育15-30分鐘。
4、離心后去上清，收集細(xì)胞，用PBS或無(wú)血清培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞1-2次，最后加入PBS或無(wú)血清培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。
5、取500μL細(xì)胞懸液，用激光共聚焦/流式細(xì)胞儀檢測(cè)。激發(fā)波長(zhǎng)為488 nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為526 nm。
可以在熒光顯微鏡下直接觀察標(biāo)記效果，也可以在培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)間后再用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞，或用于其他特定實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡募?xì)胞熒光示蹤。標(biāo)記的細(xì)胞也可以用于活體動(dòng)物的移植，并用熒光進(jìn)行示蹤。標(biāo)記的細(xì)胞呈綠色熒光。
6、隨后還可按照細(xì)胞的正常培養(yǎng)方法進(jìn)行培養(yǎng)。
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