MTS溶液可以直接加入到細(xì)胞樣品中，不需要預(yù)配各種成分，MTS溶液很穩(wěn)定，對(duì)細(xì)胞沒有毒性，可以長(zhǎng)時(shí)間孵育細(xì)胞。MTS法測(cè)定細(xì)胞增殖或毒性試驗(yàn)中活細(xì)胞數(shù)目的靈敏度高，無(wú)放射性，檢測(cè)細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)的靈敏度比其它方法如MTT, XTT和WST-1高。...

產(chǎn)品特點(diǎn)：

● 易于使用：直接將MTS溶液，加入到細(xì)胞中，孵育然后讀取吸光度值。

● 快速：在96孔板中進(jìn)行檢測(cè)，不需洗滌或收獲細(xì)胞。也不需要溶解步驟。因?yàn)镸TS甲臢產(chǎn)物可溶解在組織培養(yǎng)基中。

● 非放射性：不需液閃混合液，不需處理放射性廢物（不像[3H]-胸腺嘧啶）。

● 靈活：平板被讀數(shù)后還可以放回溫箱繼續(xù)顏色反應(yīng)（不像MTT）。

● 安全：不需要揮發(fā)性有機(jī)溶劑來(lái)溶解甲臢化合物（不像MTT）。

應(yīng)用：

● 細(xì)胞增殖；細(xì)胞毒性；凋亡結(jié)果 ● 化學(xué)靈敏性 ● 細(xì)胞貼附確定；趨化性

樣本類型：

● 懸浮細(xì)胞 ● 貼壁細(xì)胞

試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：

● 帶有450nm波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀/分光光度計(jì) ● CO₂培養(yǎng)箱 ● 離心機(jī) ● 移液器 ● 96孔培養(yǎng)板

● PBS緩沖液 ● HBSS

使用注意事項(xiàng)：

● 需長(zhǎng)時(shí)間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融，否則將會(huì)增加空白吸收，從而影響檢測(cè)結(jié)果。最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。

● 用培養(yǎng)基或PBS來(lái)配制待檢測(cè)藥物。

● 如果待測(cè)藥物有還原性，則測(cè)定不含細(xì)胞，僅含有MTS的待測(cè)藥物溶液在490nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入MTS,如果吸光度相對(duì)較大,則需要除去培養(yǎng)基，并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的100μL培養(yǎng)基和10μL MTS進(jìn)行檢測(cè)。

● 細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。

● 加MTS 溶液后孵育時(shí)間的長(zhǎng)短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定，對(duì)于大多數(shù)情況孵育1 小時(shí)即可，白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間。

● 如果不是使用96 孔板檢測(cè)，MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。

活性測(cè)定使用方法：

1、收集細(xì)胞，加細(xì)胞懸液100μL（約5000-10000個(gè)細(xì)胞）到96孔板（邊緣孔用無(wú)菌水或PBS填充）。每板設(shè)對(duì)照（加100μL培養(yǎng)基）。

2、置37℃，5% CO₂孵育過夜，倒置顯微鏡下觀察。

3、每孔加入10μL待檢測(cè)藥物溶液，37℃孵育。

【注】：

● 此處以藥物處理細(xì)胞為例，實(shí)際以自己的細(xì)胞樣品為準(zhǔn)。

● 用各種方法制備的細(xì)胞模型按下面方法加入MTS試劑后檢測(cè)即可。

4、每孔加入10μL MTS 溶液，37℃孵育1-4小時(shí)。

【注】：

● 此處以96孔板加樣為例，實(shí)際檢測(cè)時(shí)以自己的細(xì)胞培養(yǎng)容器為準(zhǔn)。

● 按培養(yǎng)基的用量的10%比例添加MTS試劑即可。

5、測(cè)定490nm各孔的吸光值。

6、同時(shí)設(shè)置空白孔（培養(yǎng)基和MTS溶液，無(wú)細(xì)胞），對(duì)照孔（不加藥培養(yǎng)基和MTS溶液，有細(xì)胞），每組設(shè)定3-5復(fù)孔。

【注】：

● 復(fù)孔數(shù)量根據(jù)自己實(shí)際需要設(shè)定，為了降低試劑消耗成本，可以少設(shè)復(fù)孔。

結(jié)果分析：

細(xì)胞活力計(jì)算：

將各測(cè)試孔的OD值減去調(diào)零孔OD值或?qū)φ湛譕D值。各重復(fù)孔的OD值取平均數(shù)。

細(xì)胞活力% =（加藥細(xì)胞OD-空白OD/對(duì)照細(xì)胞OD-空白OD）×100

數(shù)量測(cè)定使用方法：

1、先用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量，然后接種細(xì)胞。

2、按比例(例如：1/2 比例)依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個(gè)細(xì)胞濃度梯度，一般要做3-5個(gè)細(xì)胞濃度梯度，每組3-6個(gè)復(fù)孔。

3、接種后培養(yǎng)2-4小時(shí)使細(xì)胞貼壁，然后加MTS試劑培養(yǎng)一定時(shí)間后測(cè)定OD值，制作出一條以細(xì)胞數(shù)量為橫坐標(biāo)(X軸)，OD值為縱坐標(biāo)(Y軸)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線可以測(cè)定出未知樣品的細(xì)胞數(shù)量 (使用此標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提條件是實(shí)驗(yàn)的條件要一致，便于確定細(xì)胞的接種數(shù)量以及加入MTS后的培養(yǎng)時(shí)間)。

常見問題：

● 檢測(cè)時(shí)需要換液?jiǎn)幔?

如果待測(cè)藥物有還原性，需要換液，否則不需要。

● 如何判斷待測(cè)藥物是否含有還原性？

測(cè)定不含細(xì)胞，僅含有待測(cè)藥物的溶液加入MTS反應(yīng)后的在490nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小，說明待測(cè)藥物沒有還原性或還原性很小，對(duì)MTS沒有影響，則可以不換液，在培養(yǎng)基中直接加入MTS；如果吸光度相對(duì)較大，說明藥物具有較強(qiáng)的還原性，則需要除去含藥物的培養(yǎng)基，并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的100μL培養(yǎng)基和10μL MTS進(jìn)行檢測(cè)。

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