細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)染色試劑盒是利用E02熒光進(jìn)行內(nèi)質(zhì)網(wǎng)特異性熒光染色的試劑盒。該探針具有細(xì)胞膜透過性，對(duì)活細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)具有高度選擇性的探針，不像傳統(tǒng)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)熒光探針，該探針幾乎不對(duì)線粒體著色，且在較低濃度即可實(shí)現(xiàn)對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的染色，且對(duì)細(xì)胞幾乎無(wú)毒性。...

檢測(cè)方法：

● 熒光顯微鏡 ● 激光共聚焦 ● 流式細(xì)胞儀

樣本類型：

● 懸浮細(xì)胞 ● 貼壁細(xì)胞

試劑盒以外自備試劑和儀器：

● 熒光顯微鏡/激光共聚焦 ● 離心機(jī) ● PBS ● 或者HBSS（無(wú)酚紅）

注意事項(xiàng)：

● 螺旋蓋微量管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。

● E02染色探針液為DMSO溶液，冬季氣溫較低時(shí)在室溫時(shí)為凝固狀態(tài)，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱溶解，吸頭也需要放在培養(yǎng)箱預(yù)熱，否者容易再次凝固在吸頭內(nèi)壁產(chǎn)生損耗。

● 用前，先將本品取出回溫至室溫，并對(duì)其進(jìn)行簡(jiǎn)短離心使DMSO溶液集中于管底。

● 細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。

● 標(biāo)記的條件因細(xì)胞種類而異，根據(jù)不同樣本的實(shí)際染色結(jié)果做相應(yīng)調(diào)整，在每次實(shí)驗(yàn)前，請(qǐng)先根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)要求、細(xì)胞類型、細(xì)胞的膜通透性等進(jìn)行優(yōu)化，確定最佳條件。以下方法僅供參考。

● 染色后立即進(jìn)行分析。

● 本染色液可用于細(xì)胞涂片、細(xì)胞的檢測(cè)。

使用方法：

1、染色工作液配制：

根據(jù)樣本數(shù)量，用37℃培養(yǎng)箱預(yù)熱HBSS或PBS或其他緩沖液將E02熒光染料500-1000倍稀釋。配制成染色工作液。

【注】：

● 建議收到產(chǎn)品后，根據(jù)單次使用量，對(duì)母液進(jìn)行小量分裝，每次使用一管，試劑-20℃避光凍存，一年穩(wěn)定。

● 工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。

● 以下實(shí)驗(yàn)方案經(jīng)牛肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞優(yōu)化，且已被其他常規(guī)細(xì)胞系驗(yàn)證。但不同細(xì)胞類型其最佳使用條件不同，還需用戶根據(jù)該方案進(jìn)行進(jìn)一步優(yōu)化染色濃度和時(shí)間。

2、細(xì)胞染色

懸浮細(xì)胞染色

1) 用HBSS洗滌細(xì)胞2次。

【注】：

● 500×g離心5分鐘。

2) 加入適量體積的預(yù)熱的染色工作液重懸細(xì)胞。

3) 在37℃孵育細(xì)胞5～20分鐘，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同。可以用10分鐘作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記結(jié)果。

【注】：

● 若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長(zhǎng)染色時(shí)間。

4) 孵育結(jié)束，500×g離心2分鐘。

5) 移除上清液，加入37℃預(yù)熱的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。

6) 在激光共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞。

貼壁細(xì)胞染色

1) 用HBSS洗滌細(xì)胞2次。

2) 細(xì)胞培養(yǎng)板中或細(xì)胞爬片上加入適量體積的預(yù)熱染色工作液。

【注】：

● 96孔細(xì)胞培養(yǎng)板每孔加入200μL染色液。

3) 37℃孵育細(xì)胞5～20分鐘，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同?？梢杂?0分鐘作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記結(jié)果。

【注】：

● 若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長(zhǎng)染色時(shí)間。

4) 吸干染色工作液，加入新鮮培養(yǎng)基。

5) 在激光共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞。

3、用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)。

激發(fā)波長(zhǎng)為488nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為500nm。

常見問題分析：

● 可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行固定嗎？

已染色細(xì)胞用固定后，僅部分熒光探針留在細(xì)胞內(nèi)，熒光信號(hào)會(huì)有部分衰減。

● 固定細(xì)胞的方法？

用4%甲醛于37℃固定細(xì)胞2min。細(xì)胞固定后，可用合適緩沖液進(jìn)行清洗，每次5min，共2 次。清洗后可對(duì)細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)封片、鏡檢或進(jìn)一步染色。

● 可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行透化處理嗎？

不建議對(duì)細(xì)胞進(jìn)行透化處理，因?yàn)榻?jīng)Triton X-100或其它透化劑透化后，細(xì)胞內(nèi)將無(wú)熒光信號(hào)保留。

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