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樊克生物講解:ELISA實驗出現(xiàn)異常的原因分析

發(fā)布時間:2019-04-28瀏覽次數(shù):1073返回列表

  ELISA實驗是我們大家zui常見的實驗,也是比較容易出問題的實驗,可能你一不小心,你的整個實驗便是無功能重來那!所以樊克小編給您講解在使用ELISA試劑盒做實驗的時候,有些細節(jié)若是做不好會出現(xiàn)實驗異常,或者效果不佳,那么你有想過是什么原因嗎?

一、白板異常:顯色步驟結(jié)束后,酶標(biāo)板所有孔均無顏色。陽性對照不顯色。

1. 試劑已過效期,或不同試劑盒組分混用(解決方式:檢查試劑的組分及批號,確認未過期以及所有組分均屬對應(yīng)的試劑盒。不同試劑盒或不同批號的試劑不能混用)。

2. 錯加、漏加試劑底物、顯色劑 A或B(解決方式:嚴(yán)格按說明書的步驟操作,加完試劑后可觀察一下液面高度是否一致,以減少漏加現(xiàn)象)。

3. 洗板及加樣過程中,酶標(biāo)受污染失活失去催化顯色劑顯色的能力(解決方式:確認盛酶標(biāo)的容器不含酶抑制劑如疊氮鈉等,確認配制洗液的容器已洗干凈)。

4. 終止液誤作洗滌液稀釋或當(dāng)?shù)孜锞彌_液配制(解決方式:每次配制時都應(yīng)看清標(biāo)簽標(biāo)明物質(zhì))。5. 蒸餾水有問題(解決方式:確認配制洗液的純化水達到要求且未污染,與好蒸餾水比較)?!わ@色弱、靈敏度低:實驗結(jié)束后,包括陽性對照、質(zhì)控在內(nèi)的所有板孔顏色均較淡。

二、陰陽性對照正常,但質(zhì)控、參考品或個別弱陽性標(biāo)本未能檢出。

1. 未達要求的孵育溫度及孵育時間可檢出強陽性標(biāo)本,但質(zhì)控或弱陽性標(biāo)本受 溫度變化影響較大而被未檢出(解決方式:質(zhì)控品或標(biāo)本避免反復(fù)凍融。標(biāo)本在一周內(nèi)使用的,可存于 2-8℃,如需長期保存,應(yīng)置于-20℃以下保存。質(zhì)控品應(yīng)小量分裝,并置于-20℃以下保存)。

2. 質(zhì)控品或標(biāo)本高溫放置過久,或被反復(fù)凍融致待測物滴度下降,而未能檢出(解決方式:重新設(shè)定酶標(biāo)儀的參數(shù),特別是檢查濾光片是否匹配)。

3. 儀器設(shè)定不正確,濾光片不匹配(解決方式:重新設(shè)定酶標(biāo)儀的參數(shù),特別是檢查濾光片是否匹配)。

三、實驗結(jié)束后,陰陽性對照正常,質(zhì)控正常,但臨床標(biāo)本感覺顯色較弱

1. 待測標(biāo)本中可能不含強陽性標(biāo)本,故結(jié)果可能是正常的(解決方式:如有懷疑,可復(fù)檢)。

2. 標(biāo)本加入疊氮鈉作為防腐劑(解決方式:酶免實驗中的標(biāo)本禁用疊氮鈉作為防腐劑,可選用 proclin、硫柳汞等其他防腐劑)。

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