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白介素ELISA檢測試劑盒的測定原理
發(fā)布時(shí)間:2019-06-03瀏覽次數(shù):1968返回列表
白介素ELISA檢測試劑盒采用雙抗體夾心法作為測定的方法時(shí),試劑盒的組成一般包括:已包被單抗的酶標(biāo)板:一塊,有96孔的,也有48孔的,可拆缷,外面有鋁箔袋密封,打開后有干燥劑,實(shí)驗(yàn)時(shí)暫未使用的酶標(biāo)條要連帶干燥劑密封好,放在4℃冰箱中妥善保存。今天我們主要介紹其測定原理。
現(xiàn)在白介素ELISA檢測試劑盒除非是測定抗體的以外,一般使用的是雙抗體夾心法,此種方法大多數(shù)用的是增強(qiáng)的雙抗體夾心法,即使用生物素-親和素系統(tǒng),還有少數(shù)的指標(biāo)可能使用競爭法,這類方法適用于半抗原的測定。
具有復(fù)雜結(jié)構(gòu)的多表位蛋白抗原,其雙抗體夾心法中的一個(gè)抗體必須用單抗,否則背景很高。當(dāng)然如果兩個(gè)都是單抗(這兩個(gè)單抗針對不同表位),那么測定的線性范圍就較寬,試劑盒性能就較好;一個(gè)用單抗,一個(gè)用多抗,測定的靈敏度會較高。
某些簡單的化合物用白介素ELISA檢測試劑盒測定時(shí),因?yàn)闆]有兩個(gè)或以上的表位,一般只能作為半抗原,只能用競爭法測定。如果你發(fā)現(xiàn)有測定簡單化合物(如雌激素、NO、地高辛等)用雙抗體夾心法作測定原理時(shí),這個(gè)試劑盒你就要懷疑了。另外還要說明一步雙抗體夾心法與兩步雙抗體夾心法的區(qū)別。
一步雙抗體夾心法的吸光度-劑量曲線呈鐘形,隨著待則標(biāo)本中抗原濃度的增加而升高至一定程度后,測定吸光度即隨抗原濃度的增加而開始下降直至不顯色,即所謂的“鉤狀效應(yīng)”,也就是我們在免疫沉淀試驗(yàn)中所稱的“帶現(xiàn)象”。所以當(dāng)使用一步雙抗體夾心法時(shí),樣品濃度太高,有時(shí)會出現(xiàn)測不出來的現(xiàn)象,此時(shí)要作適當(dāng)?shù)南♂尣拍軠?zhǔn)確測定。
試驗(yàn)中,白介素ELISA檢測試劑盒的每一步操作都有可能影響實(shí)驗(yàn)的成功與否,所以一定要確保操作方法正確,尤其要注意相關(guān)的細(xì)節(jié)問題!