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瓊脂糖核酸電泳標(biāo)準(zhǔn)實驗步驟

發(fā)布時間:2020-05-18瀏覽次數(shù):1237返回列表

1.用蒸餾水將制膠模具和梳子沖洗干凈,放在制膠平板上,封閉模具邊緣,架好梳子;

2.根據(jù)欲分離DNA片段大小用凝膠緩沖液配制適宜濃度的瓊脂糖凝膠:準(zhǔn)確稱量瓊脂糖干粉,加入到配膠用的三角燒瓶內(nèi),定量加入電泳緩沖液(一般20~30 ml);

3.放入到微波爐內(nèi)加熱熔化。冷卻片刻,加入一滴熒光染料,輕輕旋轉(zhuǎn)以充分混勻凝膠溶液,倒入電泳槽中,待其凝固;

4.室溫下30~45分鐘后凝膠完全凝結(jié),小心拔出梳子,將凝膠安放在電泳槽內(nèi);

5.向電泳槽中倒入電泳緩沖液,其量以沒過膠面1mm為宜,如樣品孔內(nèi)有氣泡,應(yīng)設(shè)法除去;

6.在DNA樣品中加入10×體積的載樣緩沖液(loading buffer),混勻后,用槍將樣品混合液緩慢加入被浸沒的凝膠加樣孔內(nèi);

7.接通電源,紅色為正,黑色為負(fù),切記DNA樣品由負(fù)往正泳動 (靠近加樣孔的一端為負(fù))。一般60~100V電壓,電泳20~40min即可;

8. 根據(jù)指示劑泳動的位置,判斷是否終止電泳;

9.電泳完畢,關(guān)上電源,在凝膠成像儀上觀察電泳帶及其位置,并與核酸分子量標(biāo)準(zhǔn)Marker比較被擴增產(chǎn)物的大小。

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            瓊脂糖凝膠濃度與線形DNA的zui佳分辨范圍

            瓊脂糖凝膠濃度

            線形DNA的zui佳分辨范圍(bp)

            0.5%

            1,000~30,000

            0.7%

            800~12,000

            1.0%

            500~10,000

            1.2%

            400~7,000

            1.5%

            200~3,000

            2.0%

            50~2,000