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人源血清學檢測二抗怎么選？
發(fā)布時間：2020-06-11瀏覽次數(shù)：1203返回列表
血清學檢測是許多健康問題診斷過程中的關(guān)鍵檢測方法，包括器官移植篩查，交叉匹配，疾病診斷，監(jiān)測等。這些檢測在臨床決策中起著至關(guān)重要的作用，免疫分析是目前可用的zui強大，zui靈敏的血清學檢測方法之一，它基于抗原抗體之間的高度特異性結(jié)合，即使在低濃度下也能進行定性和定量檢測。有多種免疫測定方法，以下是其中zui常見兩種檢測方法示意圖，分別是夾心法（圖1A）和直接法（圖1B），當選擇用于夾心法檢測的抗人二抗時（圖1A），需要考慮一抗的種屬，并使用與該物種有zui小交叉反應的二抗。
圖1：測定方式：A.夾心法，B.直接法
免疫分析在多種疾病診斷起重要作用
各類免疫測定技術(shù)各有優(yōu)缺點，例如，快速測定法（如膠體金側(cè)向流動法）可在數(shù)min 內(nèi)提供定性結(jié)果，可進行即時檢測，而ELISA可能需要花費數(shù)小時才能完成，但可提供定量數(shù)據(jù)。
而當前嚴重急性呼吸系統(tǒng)綜合癥冠狀病毒2（SARS-CoV-2）大流行g(shù)eng加凸顯了側(cè)向流動分析的，由于該疾病具有快速傳播和較高的死亡率等特征，美國FDA已采取相關(guān)措施，允許各州未經(jīng)FDA批準就可開展新的SARS-CoV-2檢測。該修訂允許使用快速檢測試劑盒，該試劑盒定性檢測患者針對SARS-CoV-2產(chǎn)生的IgG和IgM抗體，從而顯著加大了SARS-CoV-2的檢測能力，盡可能地減少病毒的傳播。盡管側(cè)向流動檢測具有明顯的，但這種分析方法無法提供定量的數(shù)據(jù)。
表1.幾種類型的免疫測定法的優(yōu)缺點，檢測過程，檢測的Ig類型
| 免疫測定方法 | 檢測過程 | 可檢測免疫球蛋白亞型 |
| 快速測試/橫向流動（膠體金） | 膠體金層析試紙條主要由4個部分組成：在樣品區(qū)滴加樣品后，借助毛細作用，樣品泳動至玻璃纖維膜，金標復合物溶解，并與樣品進行抗原抗體反應，形成復合物，繼續(xù)泳動至硝酸纖維素膜的檢測區(qū)，帶有金標記的復合物被檢測區(qū)抗原或抗體捕獲，呈現(xiàn)條帶。而質(zhì)控線不管有無目的樣本，都會與金標抗體進行結(jié)合并顯色，相當于我們的陽性對照，證明金標抗體是正常的。 | IgG，IgM |
| 流式細胞 | 將血清樣品添加到帶有抗原的細胞或磁珠中，樣本中的人源抗體會捕獲抗原，再加入熒光探針偶聯(lián)的二抗（圖1B），然后可以通過流式細胞儀分析熒光以給出定量數(shù)據(jù)。 | IgG，IgM，IgA |
| 流動注射分析（FIA） | 與流式細胞術(shù)相似，將樣品注射到含有固定抗原的柱子中，樣品中的人源抗體會與抗原結(jié)合（圖1B），再加入熒光探針或酶偶聯(lián)抗人的二抗進行檢測，用比色或熒光法進行檢測。 | IgG，IgM，IgA |
| ELISA法 | 將一抗固定在固體介質(zhì)表面上，通常是微孔板，隨后會捕獲抗原（圖1A）或?qū)⒖乖苯影辉诎迳希▓D1B），與來自血清的人源抗體結(jié)合，加入酶標記的抗人二抗，zui后，添加酶底物，從而得到與分析物濃度成正比的比色讀數(shù)。 | IgG，IgM，IgA |
| 聚合酶鏈反應（PCR） | 該過程類似于ELISA，但是第二抗體是與寡核苷酸綴合。然后通過實時PCR進行DNA擴增和檢測。 | IgG，IgM，IgA |
抗人二抗是各類免疫分析中的關(guān)鍵試劑
盡管免疫測定的功能和目的有所不同，但為了在臨床上獲得準確，可靠數(shù)據(jù)，開發(fā)血清學試劑盒時，高質(zhì)量試劑至關(guān)重要。抗人二抗的質(zhì)量是開發(fā)免疫測定試劑盒時的關(guān)鍵考慮因素，二抗需要謹慎選擇，因為它們會結(jié)合一種一抗的多個表位上，從而增強了信號的靈敏度和選擇性。表2總結(jié)了在進行免疫測定選擇合適的二抗時需要考慮的多個方面。
表2.在免疫分析中選擇合適的二抗時的考慮因素以及我們抗體的特征
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考慮因素 | Jackson 二抗 |
| 抗體來源 | 人體樣品的血清學檢測應使用抗人二抗，以zui大程度地減少非特異性結(jié)合，以zui大程度降低背景信號和假陽性。 | 我們可以提供多種來源的抗人二抗，包括羊駝，驢，山羊，小鼠和兔子。 |
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產(chǎn)品類別 (完整的IgG還是片段) |
二抗可以是完整的免疫球蛋白（Ig）G，也可以是F（ab'）2和Fab片段，完整的IgG分子可適用于大多數(shù)檢測，而F（ab'）2和Fab片段可用于避免與具有Fc受體的活細胞的非特異性結(jié)合。 | 我們可以提供完整IgG形式的二抗以及F（ab'）2和Fab片段 |
| 特異性 | 根據(jù)所需免疫測定的特異性，可以制備針對整個Ig分子的二抗，以及針對于Fc或F（ab'）2結(jié)構(gòu)域特異性的二抗。 | 我們可以提供針對于對整個人源Ig分子的二抗，以及針對于Fc和F（ab'）2結(jié)構(gòu)域特異性的二抗。 |
| 亞型 | 大多數(shù)免疫測定均只檢測IgG型抗體，這種類型抗體占總血清Ig的?75％，是次級免疫反應的一部分。但是，血清中同時也存在IgM和IgA，而且二抗只對同亞型一抗的具有特異性。 | 我們可以提供對IgG，IgM，IgA，IgG+IgM和IgG+IgM+IgA一種或幾種亞型有特異性的二抗。 |
| 親和純化和交叉吸附 | 由于在Ig結(jié)構(gòu)域具有高度的結(jié)構(gòu)保守性，建議對抗體進行親和純化并進行交叉血清吸附的，以減少交叉反應的可能性。 | 免疫親和層析可用于分離親和純化的抗體。我們可以選擇已進行物種交叉吸附的抗體，交叉吸附相關(guān)信息會在對應產(chǎn)品說明括號中提供，表示為“ min X”，“X”為相關(guān)物種的縮寫。 |
| 偶聯(lián)標記 | 二抗通常與分子偶聯(lián)，例如酶，熒光探針或有色顆粒。免疫測定的檢測系統(tǒng)將確定標記物的種類。 | 抗人二抗可以與多種標記物偶聯(lián)，包括生物素，AP，HRP，熒光基團和膠體金納米顆粒。 |
