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如何評價(jià)和選擇支原體檢測試劑盒

發(fā)布時(shí)間:2020-09-03瀏覽次數(shù):1365返回列表

要選一款合適的支原體檢測試劑盒,有如下幾個(gè)評價(jià)指標(biāo):

1. 靈敏度。

靈敏度常用支原體基因組的拷貝數(shù)或支原體菌株的CFU表示。

2. 特異性和廣譜性。

質(zhì)量好的試劑盒應(yīng)檢測的支原體物種越多越多,并且特異性強(qiáng),即只針對支原體,不針對其他細(xì)菌等微生物,沒有交叉反應(yīng)。

3. 穩(wěn)定性。

凍干粉比液體試劑的穩(wěn)定性高。

4. 樣本類型及樣本處理。

一款好的試劑盒,會(huì)標(biāo)出它適合的樣本類型,也會(huì)說明如何處理樣本。要注意有的樣本含有抑制PCR反應(yīng)的物質(zhì),因此需要處理。

5. 對照品。

一個(gè)好的試劑盒,會(huì)帶有陽性對照和內(nèi)控對照。內(nèi)控對照是用于監(jiān)測PCR是否正常。如果樣本含有抑制PCR的物質(zhì),則內(nèi)控對照的條帶會(huì)發(fā)生缺失。有嚴(yán)重支原體污染的樣本由于樣本中的支原體對內(nèi)控對照產(chǎn)生了競爭性抑制,因此支原體條帶越強(qiáng),內(nèi)控條帶越弱(下圖)。

圖. 1. 100 bp DNA Ladder;2. 陰性對照,有內(nèi)控條帶;3. 陽性對照,有支原體陽性條帶;4. 樣本有PCR抑制劑;5.陰性樣本;6.陽性樣本,支原體污染較輕;7.陽性樣本,支原體污染較重。


但支原體核酸檢測法(NAT)并沒有載入我國藥典。我們藥典的是支原體培養(yǎng)法和DNA染色法。但2018年《中國藥事》第8期上,中國食品藥品檢定研究院刊發(fā)了一篇文章——《支原體檢查的核酸檢測方法及方法學(xué)驗(yàn)證的思考》,提出提出要與國-際接軌,逐漸推進(jìn)NAT的開展,因其“具有快速、靈敏、便捷等特點(diǎn)”。


歐洲藥典規(guī)定,核酸法如替代培養(yǎng)基,核酸法的靈敏度需達(dá)到10 CFU·mL-1;如替代DNA染色法,核酸法的靈敏度需達(dá)到100 CFU·mL-1。該文也提出,需對NAT進(jìn)行特異性、zui低檢出限和耐用性的驗(yàn)證。

因此,對于需要NAT法檢查支原體的生物制品和細(xì)胞治療產(chǎn)品企業(yè),可選擇試劑盒已經(jīng)驗(yàn)證并提供有參比物質(zhì)的知名品牌廠家,盡管后續(xù)仍需按照待測樣本類型進(jìn)行方法的適用性驗(yàn)證,并同步開展藥典方法的平行檢測研究,但已為NAT法檢查支原體帶來極-大的方便。

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