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公司名稱:上海古朵生物科技有限公司
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慢病毒RNAi干擾實(shí)驗(yàn)原理
發(fā)布時間:2021-03-12瀏覽次數(shù):1025返回列表
(1)原理
慢病毒是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種,具有逆轉(zhuǎn)錄病毒的基本結(jié)構(gòu),但也有不同于逆轉(zhuǎn)錄病毒的組份和特性,作為基因治療載體發(fā)展起來,z近已用于轉(zhuǎn)基因動物制備。利用慢病毒構(gòu)建的shRNA/miRNA載體,與化學(xué)合成的siRNA和基于瞬時表達(dá)載體構(gòu)建的shRNA相比。
一方面可以擴(kuò)增替代瞬時表達(dá)載體使用,另一方面,lentivirus-shRNA/miRNA克隆經(jīng)過慢病毒包裝系統(tǒng)包裝后,可用于感染依靠傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染試劑難于轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系如原代細(xì)胞、懸浮細(xì)胞和處于非分裂狀態(tài)的細(xì)胞,并且在感染后可以整合到受感染細(xì)胞的基因組,進(jìn)行長時間的穩(wěn)定表達(dá)。
(2)服務(wù)流程
1)含目的基因的慢病毒RNAi干擾載體的構(gòu)建和純化提取;
2)慢病毒干擾載體、pGag/Pol、pRev、pVSV-G四質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞;
3)培養(yǎng)48~72h,收集培養(yǎng)上清;
4)病毒的純化和濃縮(超離和/或超濾);
5)滴度測定、目的基因檢定
6)將制得的慢病毒液轉(zhuǎn)導(dǎo)客戶的靶細(xì)胞,篩選混合穩(wěn)定細(xì)胞株,并檢測靶基因的表達(dá)。
客戶提供
1)表達(dá)miRNA/shRNA的質(zhì)粒(提供測序圖譜)或所要Knockdown的靶基因的名稱、序列;
2)所需要的病毒滴度及總量,病毒是否需要純化
3)若需要檢測靶基因的表達(dá)變化,如需要請?zhí)峁┫鄳?yīng)的抗體
我們提供
1)提供重組后的慢病毒載體質(zhì)粒
2)提供已測定好滴度、可以直接進(jìn)行后續(xù)分析的慢病毒儲存液