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石蠟切片和冰凍切片的區(qū)別你造嗎~
發(fā)布時間:2021-05-07瀏覽次數(shù):6620返回列表
石蠟切片與冰凍切片在組織學(xué)中,蕞常用到的有石蠟切片與冰凍切片。兩者各有優(yōu)缺點,在實驗的應(yīng)用上也有所不同,比如石蠟切片常用于進行免疫組化實驗,冰凍切片常用于免疫熒光實驗。而兩個實驗都是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理——即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理,通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì),對其進行定位、定性及相對定量的研究。下面詳細(xì)介紹下兩種方法的異同點。
一.石蠟切片
石蠟切片組織學(xué)常規(guī)制片技術(shù)中蕞為廣泛應(yīng)用的方法。常用于觀察正常細(xì)胞組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)。一般的組織從取材固定到封片制成玻片標(biāo)本需要數(shù)日,但標(biāo)本可以長期保存使用,是一種永-久性顯微玻片標(biāo)本。
1、固定:將新鮮組織切成小塊,固定于4%多聚甲醛過夜。
原理:固定時間則根據(jù)材料塊的大小及松密程度而定。固定可以凝固組織中的物質(zhì)成分、終止細(xì)胞的一切代謝過程、防止細(xì)胞自溶或組織變化,盡可能保持其活體時的結(jié)構(gòu)。同時能使組織硬化,有利于切片的進行。
2、脫水:為了減少組織材料的急劇收縮,應(yīng)使用從低濃度到高濃度遞增的順序進行經(jīng)70%、85%、95%直至純酒精(無水乙醇),每次時間為1小時。
原理:固定后的組織材料需除去留在組織內(nèi)的固定液及其結(jié)晶沉淀,否則會影響后期的染色效果。原因在于透明劑多數(shù)是苯類,苯類和石蠟均不能與水相融合,水分不能脫盡,苯類無法浸入。酒精為常用脫水劑,它既能與水相混合,又能與透明劑相混。
3、透明:常用的透明劑有二甲苯,二甲苯是石蠟的溶劑。此步蕞好在通風(fēng)廚進行。
原理:純酒精不能與石蠟相溶,還需用能與酒精和石蠟相溶的溶劑,替換出組織內(nèi)的酒精。材料塊在透明劑浸漬過程稱透明。
4、浸蠟:先把組織材料塊放在熔化的石蠟和二甲苯的等量混合液浸漬1小時。先后移入2個熔化的石蠟液中浸漬1小時左右。
原理:使石蠟浸入組織而起支持作用。
5、包埋:以少許熱蠟液將其底部迅速貼附于包埋盒內(nèi)上,然后置于速凍臺,讓石蠟固定。
6、切片:切片刀的銳利與否、蠟塊硬度是否適當(dāng)都直接影響切片質(zhì)量,可將蠟塊至于冷水中改變蠟塊硬度。通常切片厚度為5微米,用毛筆輕托輕放在37度水浴中展片。
7、貼片與烤片:將水浴中展片撈至玻片上鋪正,然后將載玻片放入37℃溫箱中干燥。
8、切片脫蠟及水化:干燥后的切片置于二甲苯中進行脫蠟,然后依次使用從高濃度到低濃度遞減的順序進行經(jīng)純酒精、95%、85%、70%進行水化。
原理:切片需脫蠟及水化才能在水溶性染液中進行染色。用二甲苯脫蠟,再逐級經(jīng)純酒精及梯度酒精直至蒸餾水。
9、染色:染色的目的是使細(xì)胞組織內(nèi)的不同結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)不同的顏色以便于觀察。
經(jīng)典的蘇木精和伊紅:細(xì)胞核被蘇木精染成紫藍(lán)色,多數(shù)細(xì)胞質(zhì)及非細(xì)胞成分被伊紅染成粉紅色。實驗操作簡單。
免疫組化:指帶顯色劑標(biāo)記的特異性抗體在組織細(xì)胞原位通過抗原抗體反應(yīng)和組織化學(xué)的呈色反應(yīng)。
二.冰凍切片
冰凍切片, 優(yōu)點是能夠較好的保存組織的抗原免疫活性,做免疫組化時不需抗原修復(fù)這一步。 缺點是細(xì)胞內(nèi)易形成冰晶而破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu),可能會使抗原彌散。因其制作過程較石蠟切片快捷、簡便,而 多應(yīng)用于手術(shù)中的快速病理診斷。
冰凍切片相比較于石蠟切片簡單易行,一般進行固定脫水后,固定于包埋劑就可以在冰凍切片機進行切片。有些新鮮標(biāo)本可以直接取材后,冷凍托涂包埋劑后置于冷凍托上速凍,凍好后立即切片。
冰凍切片蕞重要的是防止樣品中冰晶的出現(xiàn),一般可以通過速凍的方法使組織溫度驟降,減少樣品內(nèi)冰晶的形成。也可以將組織置于20%~30%蔗糖溶液l~3天,利用高滲吸收組織中水分,減少組織含水