一．原理
  DNA片斷的分離與回收是基因工程操作中的一項(xiàng)重要技術(shù)，例如可收集特定酶切片斷用于克隆或制備探針，回收PCR產(chǎn)物用于再次鑒定等?；厥諏?shí)驗(yàn)中兩個(gè)重要的技術(shù)指標(biāo)是純度和回收率：前者未達(dá)標(biāo)時(shí)會(huì)嚴(yán)重影響以后的酶切、連接、標(biāo)記等酶參與的反應(yīng)；后者不理想時(shí)往往會(huì)大大增加前期的工作量。

  本實(shí)驗(yàn)采用的是V-GENE公司的DNA凝膠回收試劑盒，其原理是：在凝膠融化液（Buffer DE-A）中凝膠塊被迅速融化并釋放出DNA。加入高離液序列溶液（Buffer DE-B）后DNA片斷被選擇性吸附到silica膜上。經(jīng)Buffer W1、Buffer W2洗滌去除殘留在silica膜上的雜質(zhì)和高濃度鹽離子后，吸附到 silica膜上的DNA片斷經(jīng)微量水或Eluent洗脫下來(lái)，即可用于各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

  二．材料與方法
  1 材料
  PCR產(chǎn)物（未經(jīng)純化）

  2 儀器、用具
  電泳儀、電泳槽、凝膠樣品梳、微波爐、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、恒溫孵育器（55-65℃）、1.5ml 離心管

  3 試劑
  1×TAE電泳緩沖液；溴化乙錠溶液（EB）[有毒，小心操作] ；瓊脂糖；6×加樣緩沖液；NJ 緩沖液；DNA洗脫緩沖液；SPW洗滌緩沖液

  2.4 方法
  (1) 按常規(guī)方法于2%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳。
  (2) 在紫外燈下切下含有目的DNA的瓊脂糖凝膠，用紙巾吸盡凝膠表面液體。
  (3) 稱(chēng)量凝膠重量，以1mg=1μl換算凝膠體積。
  (4) 加入3個(gè)凝膠體積的NJ緩沖液
  (5) 懸浮均勻后于55℃-65℃加熱7min，期間每2—3min搖晃一次，直至凝膠塊完全融化。
  (6) 把DNA—瓊脂糖溶液加到一個(gè)Mu-Pu DNA回收純化柱上，并把柱子裝在一干凈的2ml收集試管內(nèi)，14000rpm離心1ml，棄去流出液。對(duì)于體積大于700μl 的樣品，則分別加到不同的柱子上，每次700μl。
  (7) 用700μl無(wú)水乙醇稀釋的SPW洗滌緩沖液洗滌柱子，加入柱子中后靜置2-3min。室溫下14000rpm離心1min。
  (8) 棄濾液，以同樣的方法再洗滌一次。
  (9) 把柱子裝在一個(gè)滅菌干凈的1.5ml 離心管上，加入30-50μl的DNA洗脫緩沖液或無(wú)菌去離子水到柱基質(zhì)上，14000rpm離心1min以洗脫出DNA。
  (10) 取3μl樣品，1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)回收結(jié)果。

  注：PCR產(chǎn)物的純化選用直接純化法還是膠回收法主要取決于PCR產(chǎn)物。若PCR產(chǎn)物電泳時(shí)為單一條帶，可采用直接純化法，即將酶、dNTP等多余物質(zhì)去掉便可；若PCR產(chǎn)物電泳時(shí)為多條帶，則要根據(jù)需要回收特定條帶，此時(shí)須選用膠回收法