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多重免疫組化vs免疫熒光
發(fā)布時(shí)間:2022-06-02瀏覽次數(shù):930返回列表
免疫熒光技術(shù)(Immunofluorescence technique,IF )又稱(chēng)熒光抗體技術(shù),是標(biāo)記免疫技術(shù)中發(fā)展早的一種。它是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來(lái)的一項(xiàng)技術(shù)。很早以來(lái)就有一些學(xué)者試圖將抗體分子與一些示蹤物質(zhì)結(jié)合,利用抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行組織或細(xì)胞內(nèi)抗原物質(zhì)的定位。
多重免疫組化(mIHC):主要的技術(shù)原理來(lái)自TSA技術(shù),TSA即酪酰胺信號(hào)放大(Tyramide signal amplification)是一類(lèi)利用辣根過(guò)氧化酶(HRP)對(duì)靶蛋白或核酸進(jìn)行高密度原位標(biāo)記的酶學(xué)檢測(cè)方法。該技術(shù)可與高性能染料Alexa Fluor、傳統(tǒng)熒光染料和比色檢測(cè)系統(tǒng)相兼容。 TSA主要原理是利用酪胺Tyramide的過(guò)氧化物酶反應(yīng)(酪胺鹽在HRP催化H202下形成共價(jià)鍵結(jié)合位點(diǎn)),產(chǎn)生大量的酶促產(chǎn)物,該產(chǎn)物能與周?chē)牡鞍讱埢?包括色氨酸、組氨酸和酪氨酸殘基)結(jié)合,這樣在抗原-抗體結(jié)合部位就有大量的生物素沉積,與隨后加入的Streptavidin—HRP/熒光基團(tuán)結(jié)合,經(jīng)幾次這樣的循環(huán)放大,可以結(jié)合大量的酶分子or熒光基團(tuán),結(jié)果使其檢測(cè)信號(hào)得到幾何級(jí)放大。