標(biāo)簽：熒光抗體 古朵生物 染色液

  古朵簡(jiǎn)述：熒光抗體染色三大方法

  熒光定量PCR 因操作方便、運(yùn)行速度快、實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)-確，受到越來(lái)越多的分子生物學(xué)研究者青睞。在實(shí)驗(yàn)技術(shù)成熟的今-天，也許對(duì)你來(lái)說(shuō)，難得不是實(shí)驗(yàn)技術(shù)上的問(wèn)題——而是選擇哪一種熒光定量PCR儀——你要征詢實(shí)驗(yàn)室成員的意見(jiàn)、分析實(shí)驗(yàn)室目前乃至將來(lái)的需求、平衡實(shí)驗(yàn)室的預(yù)算，要詳細(xì)研究各種極富you惑力的宣傳資料。面對(duì)各種不同性能的產(chǎn)品，您又該如何選擇呢?

  古朵帶您認(rèn)識(shí)熒光定量PCR的兩個(gè)誤區(qū)：

  誤區(qū)一：儀器通道越多越好

  隨著PCR技術(shù)的成熟運(yùn)用，多重?cái)U(kuò)增越來(lái)越熱鬧，熒光定量PCR儀也不能幸免。從蕞初ABI公司推出的單通道熒光定量PCR儀發(fā)展到如今各個(gè)廠家都推出4通道、5通道甚至6通道熒光定量PCR儀，眼花繚亂的選擇讓人無(wú)所適從，就有人一不小心走進(jìn)了“通道越多越好”的誤區(qū)。

  考慮多重?zé)晒舛縋CR的通道數(shù)的時(shí)候也應(yīng)該從實(shí)驗(yàn)室實(shí)際情況出發(fā)，多重PCR并非人人適用、人人可用，因?yàn)樗箤?shí)驗(yàn)復(fù)雜化了。

  誤區(qū)二：PCR儀無(wú)需梯度功能

  對(duì)于使用染料法的定量PCR反應(yīng)，雖然有各種各樣的PCR引物設(shè)計(jì)軟件或者經(jīng)驗(yàn)公式計(jì)算熔解溫度(Tm值)，但運(yùn)用的公式不同、引物序列不同，Tm值的差異會(huì)很大。引物的熔解溫度決定了退火溫度。而且模版中堿基的組合千變?nèi)f化，對(duì)于特殊片斷，經(jīng)驗(yàn)公式得到的數(shù)據(jù)不一定能得出準(zhǔn)-確的結(jié)果，退火溫度細(xì)微的差異對(duì)結(jié)果都可能產(chǎn)生決定性的影響，因而“摸條件”一度是讓人很頭疼的問(wèn)題。梯度PCR的出現(xiàn)部分解決了一些問(wèn)題——在反應(yīng)過(guò)程中每個(gè)孔的溫度控制條件可以在zhi定范圍內(nèi)按照梯度變化，根據(jù)結(jié)果，一步就可以摸索出z適合的反應(yīng)條件。

  不單退火溫度，連變性溫度和延伸溫度都可以優(yōu)化——對(duì)于多種聚合酶混合酶擴(kuò)增如Invitrogen、Clontech、Promega的多數(shù)高保真Taq酶來(lái)說(shuō)這個(gè)非常重要，因?yàn)門(mén)aq和校正酶的蕞佳反應(yīng)溫度可能有顯著差異，優(yōu)化延伸溫度就顯得很重要。

  當(dāng)我們走出誤區(qū)，想要選擇一款z適合自己需求的熒光定量PCR儀時(shí)我們又該關(guān)注些什么呢?

  1、 儀器的檢測(cè)通量

  在購(gòu)買定量PCR儀的時(shí)候要根據(jù)實(shí)驗(yàn)實(shí)的需要來(lái)選擇不同通量的儀器。目前市面上的熒光定量PCR的檢測(cè)通量小到16個(gè)多到384個(gè)。如果進(jìn)行一般的基因表達(dá)研究或病原體檢測(cè)，實(shí)在不必購(gòu)買昂貴的儀器，96孔的通量足夠用;需要尋找要新藥靶點(diǎn)和疾病標(biāo)記的實(shí)驗(yàn)室可以考慮購(gòu)買384孔板的儀器。假如經(jīng)費(fèi)有限無(wú)法購(gòu)買384孔板儀器的實(shí)驗(yàn)室，可以考慮購(gòu)買運(yùn)行速度快(帶有FAST模塊)的96孔板熒光定量PCR儀。有了高通量的儀器，你會(huì)發(fā)現(xiàn)樣品的制備和小體系、多樣本的PCR體系構(gòu)建成為限制實(shí)驗(yàn)速度和結(jié)果的頸瓶。

  2、 硬件設(shè)計(jì)特點(diǎn)

  熒光定量PCR儀主要有傳統(tǒng)的96孔板式、創(chuàng)新的離心式等，每種設(shè)計(jì)都有它的獨(dú)到之處但也都有無(wú)法避免的缺憾。

  傳統(tǒng)的96孔板的熒光定量PCR可以容納的樣本量大，而且無(wú)需特殊的耗材。有些傳統(tǒng)的96孔板的儀器采用鹵鎢燈激發(fā)、CCD檢測(cè)，這些光學(xué)結(jié)構(gòu)在96孔板的頂部，每個(gè)樣品孔距光源和檢測(cè)器的光程各不相同——邊緣效應(yīng)，對(duì)結(jié)果產(chǎn)生影響。為了保-證精-確、準(zhǔn)-確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，這類儀器在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中通常會(huì)使用ROX(一種熒光染料)或?qū)Ｓ玫腞eference dye作為參照校正實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

  3、 運(yùn)行速度

  在熒光定量PCR儀的眾多技術(shù)參數(shù)中，升降溫速度也是廠家喜歡大力宣傳的指標(biāo)。快的升降溫，可以縮短反應(yīng)進(jìn)行的時(shí)間，而且縮短了可能的非特異性結(jié)合、反應(yīng)的時(shí)間，提高PCR的特異性。

  4、 靈活性

  大規(guī)模繁忙的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備固然讓人羨慕，但是常規(guī)實(shí)驗(yàn)室同樣可以有精彩的選擇?，F(xiàn)在的儀器供應(yīng)商擁有眾多技術(shù)專家，有的還能提供整個(gè)分子生物學(xué)的基礎(chǔ)研究平臺(tái)，不但了解、滿足您現(xiàn)在的需求，而且還考慮到了你可能變化的需求——升級(jí)和換模塊。

  古朵簡(jiǎn)述：熒光抗體染色三大方法 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門(mén)從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵(lì)志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個(gè)國(guó)家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求”的經(jīng)營(yíng)宗旨;牢固樹(shù)立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場(chǎng)需求為導(dǎo)向，不斷開(kāi)發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量”的方針。