親和素-生物素系統(tǒng)在ELISA中的應(yīng)用

  生物素-親和素系統(tǒng)(BAS)是一種具有高親和力、靈敏度高、特異性強(qiáng)和穩(wěn)定性好等優(yōu)點的信號放大標(biāo)記技術(shù)，BAS具有高靈敏度、高特異性、高穩(wěn)定性和適用性等特點。生物素易與蛋白質(zhì)和核酸類等生物大分子結(jié)合，再和生物素衍生物結(jié)合，將信號多級放大，能保持大分子物質(zhì)的原有生物活性。

  親和素是一種糖蛋白，可由蛋清中提取。分子量60kD，每個分子由4個亞基組成，可以和4個生物素分子親密結(jié)合，現(xiàn)在使用zui多的是從鏈霉菌中提取的鏈霉親和素。鏈霉親和素(Streptavidin)是一種可以從鏈霉菌屬細(xì)菌 (Streptomyces avidinii )中純化獲得的四聚體蛋白，大小為52800 Da。鏈霉親和素又稱鏈霉抗生物素蛋白。生物素廣泛分布于動、植物組織中，以卵黃和肝組織含量較高，分子質(zhì)量244.31 ku。親和素亦稱抗生物素或卵白素，是從卵白蛋白中提取的一種由4個相同亞基組成的堿性糖蛋白。

  親和素與生物素間的結(jié)合具有*的親和力，其反應(yīng)呈高度專一性，特異性強(qiáng)，親和素與生物素的結(jié)合，雖不屬免疫反應(yīng)，由于1個親和素分子有4個生物素分子的結(jié)合位置，可以連接多的生物素化的分子，形成一種類似晶格的復(fù)合體。因此把親和素和生物素與ELISA偶聯(lián)起來，就可大大提高ELISA的敏感度，而且生物素和親和素一旦結(jié)合，就極為穩(wěn)定，不受在ELISA方法中的保溫及多次洗滌影響，而且這種結(jié)合反應(yīng)時間比抗原抗體反應(yīng)所需時間短;生物素或親和素與抗體分子或標(biāo)記物結(jié)合后，既不影響前者的親和力，也不改變后者的特性。親和素分子的4個活性部位并非都和連接在抗體分子上的生物素殘基結(jié)合，剩下的游離部位尚可作為另一種生物素標(biāo)記蛋白質(zhì)的受體。

  親和素-生物素系統(tǒng)在ELISA中的應(yīng)用有多種形式，可用于間接包被，也可用于終反應(yīng)放大。可以在固相上先預(yù)包被親和素，原用吸附法包被固相的抗體或抗原與生物素結(jié)合，通過親和素-生物素反應(yīng)而使生物素化的抗體或抗原固相化。這種包被法不僅可增加吸附的抗體或抗原量，而且使其結(jié)合點充分暴露。另外，還可以用生物素化的抗體替代常規(guī)ELISA中的酶標(biāo)抗體，然后連接親和素-酶結(jié)合物，從而使反應(yīng)信號放大，提高檢測的靈敏度。

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