【古朵生物】活性蛋白提取試劑盒的應(yīng)用

  活性蛋白提取試劑盒用于從動(dòng)物組織中提取有活性的總蛋白，該試劑由一種溫和的非離子型去污試劑、緩沖試劑和氯化鈉等組成。采用勻漿或超聲破碎時(shí)，該試劑高效提取的蛋白質(zhì)可以盡可能地保持活性，可以用于1D和2D電泳、免疫共沉淀、Pull down、EMSA、報(bào)告基因分析（Luciferase、β-galactosidase、Chloramphenicol Acetyltransferase等）、蛋白質(zhì)激酶分析（PKA、PKC、Tyrosine Kinase等）、酶免分析（Western Blot、ELISA、RIA）、蛋白質(zhì)純化等實(shí)驗(yàn)，含有的去污試劑可通過(guò)透析去除。

  活性蛋白提取試劑盒由抽提試劑、蛋白酶抑制劑混合物、DTT和PMSF組成。

  活性蛋白提取試劑盒特點(diǎn)：

  整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程只需要20 min左右；

  可以處理20×100 mg的動(dòng)物組織樣品；

  提取的蛋白質(zhì)可以透析去除離子和去污試劑，或?qū)⒕彌_液替換為所需要的合適緩沖液；

  提取的活性蛋白質(zhì)保持非變性狀態(tài)，可以直接用于1D和2D電泳、Pull Down、EMSA、免疫共沉淀、蛋白純化、酶活分析等實(shí)驗(yàn)；

  可以維持報(bào)告基因酶（Luciferase、β-galactosidase、Chloramphenicol Acetyltransferase等）、蛋白質(zhì)激酶（PKA、PKC、Tyrosine Kinase等）的活性。

  活性蛋白提取試劑盒操作步驟：

  1.將100 mg組織剪切成小塊，盡量去除脂肪組織和結(jié)締組織等非目的組織，加入適量的預(yù)冷的1X PBS于4°C，700 g（3000rpm）離心3 min，棄掉上清，重復(fù)洗滌兩次。

  2.向以上洗滌后的組織中加入1 mL預(yù)冷的抽提試劑（使用前向每1 mL抽提試劑中加入1μl DTT，10μl PMSF，1μl蛋白酶抑制劑），置玻璃勻漿器冰上均質(zhì)30~50次至組織完全成勻質(zhì)狀液體無(wú)明顯組織小塊。

  3.大速度渦旋振蕩10 sec，冰上放置20 min，期間取出振蕩3~5次，再于4°C，12830g（12000 rpm）離

  心10 min以沉淀組織或細(xì)胞碎片，轉(zhuǎn)移上清為組織活性總蛋白部分，分裝并保存于-80°C，用于下游實(shí)驗(yàn)。

  活性蛋白提取試劑盒上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專(zhuān)門(mén)從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵(lì)志研發(fā)和銷(xiāo)售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷(xiāo)多個(gè)國(guó)家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿(mǎn)足客戶(hù)的需求”的經(jīng)營(yíng)宗旨；牢固樹(shù)立“以客戶(hù)需求為準(zhǔn)則、以市場(chǎng)需求為導(dǎo)向，不斷開(kāi)發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶(hù)滿(mǎn)意的綜合服務(wù)質(zhì)量”的方針