如何快速測(cè)定ELISA試劑盒，試劑盒清洗試驗(yàn)原理有哪些?

  如何快速檢測(cè)ELISA試劑盒：

  ELISA試劑盒由于各種抗原成份，包括小分子的半抗原，ELISA試劑盒均可用以制備特異性的抗血清或單克隆抗體，利用此抗體作為試劑就可檢測(cè)標(biāo)本中相應(yīng)的抗原，因而免疫測(cè)定的使用規(guī)模極廣，在臨床查驗(yàn)中可用于測(cè)定：

  1) 體液中的各種蛋白質(zhì)，包括含量很少的蛋白質(zhì)如甲胎蛋白等。

  2) 激素，包括小分子量的甾體激素等。

  3) 抗生素和藥物。

  4) 病原體抗原，HBsAg、HBeAg等。

  5) 另外，也可利用純化的抗原檢測(cè)標(biāo)本中的抗體，例如抗-HBs等。

  5.符號(hào)的免疫測(cè)定

  ELISA試劑盒如上所述，免疫測(cè)定是一種很敏感的測(cè)定辦法，抗原抗體反響后直接測(cè)定構(gòu)成的沉積或濁度，敏感度可達(dá)5~10μg/ml，但在臨床查驗(yàn)中，某些待測(cè)物在標(biāo)本中的含量遠(yuǎn)低于這一水平，因而要尋覓增加敏感度的辦法。符號(hào)的免疫測(cè)定是將檢測(cè)試劑中的抗原或抗體用可微量測(cè)定的物質(zhì)加以符號(hào)，經(jīng)過測(cè)定符號(hào)物來進(jìn)步敏感度。在放射免疫測(cè)定和中，ELISA試劑盒符號(hào)物分別為放射性核素和酶，zui后用測(cè)定放射性和酶生機(jī)來計(jì)算待檢物的量，敏感度可比直接測(cè)定沉積物進(jìn)步數(shù)百至數(shù)千倍。在符號(hào)免疫測(cè)定中，一般參加過量的符號(hào)試劑以確保與待測(cè)物*反響。以符號(hào)抗體(Ab ※)檢測(cè)抗原(Ag)為例，反響式如下：

  Ag+ Ab※ →AgAb※+Ab※

  在反響產(chǎn)品中有與Ag結(jié)合的Ab※和游離和Ab※ ，如不將兩者別離而測(cè)定符號(hào)物，測(cè)得的成果將為兩者之和。因而，游離符號(hào)物與結(jié)合符號(hào)物的別離是符號(hào)免疫測(cè)定中的重要進(jìn)程?？刹捎枚喾N手段，固相載體是其中之一。如將抗原或抗體包被在固相載體上，然后再與符號(hào)的抗原或抗體直接反響，結(jié)合的符號(hào)物被固定在載體上，而游離的符號(hào)物留于溶液中。這樣能夠經(jīng)過洗刷將游離的Ab※除掉，結(jié)合符號(hào)物的測(cè)定可在固相上進(jìn)行。IgM抗體一般為保護(hù)性抗體具有免疫性。因而IgM抗體的測(cè)定，對(duì)某些流行癥如甲型肝炎有較高的臨床確診價(jià)值。

  1.3 抗原抗體反響

  1.3.1 可逆性

  抗原與抗體結(jié)合構(gòu)成抗原抗體復(fù)合物的進(jìn)程是一種動(dòng)態(tài)平衡，其反響式為：

  Ag+Ab→Ag·Ab

  抗體的親和力(affinity)是抗原抗體間的固有結(jié)合力，能夠用平衡常數(shù)K表明：

  K=[Ag·Ab]/[Ag][Ab]

  ELISA試劑盒高親和力抗體的抗原結(jié)合點(diǎn)與抗原的決定簇在空間構(gòu)型上十分適合，兩者結(jié)合結(jié)實(shí)，不易解離。解離后的抗原或抗體均能堅(jiān)持原有的結(jié)構(gòu)和活性，ELISA試劑盒因而可用親和層析法來提純抗原或抗體。在抗血清中，特異性的IgG抗體僅占總IgG中的極小部分。用親和層析法提取的特異性抗體，稱為親和層析純抗體，使用于免疫測(cè)定中可得到好的效果。試劑盒清洗試驗(yàn)原理：

  古朵生物 ELISA試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA).已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將生物su標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關(guān)系。

  自備材料

  1. 蒸餾水。

  2. 加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

  3. 振蕩器及磁力攪拌器等。

  安全性

  1. 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請(qǐng)盡快用水沖洗。

  2. 實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

  3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

  ELISA試劑盒操作注意事項(xiàng)

  1. 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。

  2. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。

  3. 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

  4. 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。

  5. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

  6. 洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。

  7. 底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。

  8. 加入ELISA試劑盒的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。

  9. 按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

  ELISA試劑盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵(lì)志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個(gè)國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場(chǎng)需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。