單克隆抗體制備成功的關(guān)鍵：抗原要求及分類(lèi)

  抗原又稱(chēng)作免疫原，是指能引起抗體生成的物質(zhì)，能夠刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生特異性抗體或致敏淋巴細(xì)胞?？乖哂忻庖咴?，能夠引起連續(xù)的免疫反應(yīng)。

  原則上任何可以誘發(fā)免疫反應(yīng)的物質(zhì)都可以做抗原，包括天然抗原和人工合成抗原，如蛋白質(zhì)、多糖、脂類(lèi)、核酸等。但是一個(gè)免疫原強(qiáng)的抗體應(yīng)滿(mǎn)足以下的要求：

  (1) 分子量足夠大。抗原決定簇一般有6-8個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成，平均5-10kD才會(huì)有一個(gè)抗原決定簇，因此分子量太小的多肽或蛋白難以形成一個(gè)抗原決定簇。

  (2) 外源性要強(qiáng)。機(jī)體可以對(duì)自身物質(zhì)形成免疫耐受，因此抗原和體內(nèi)物質(zhì)完全一樣或者相似就難以引起免疫應(yīng)答，自然也就難以產(chǎn)生抗體了。

  (3) 結(jié)構(gòu)盡量復(fù)雜。越是結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單的物質(zhì)，免疫原性越差。簡(jiǎn)單重復(fù)的物質(zhì)一般不具有免疫原性。

  (4) 可降解性好。

  抗原按照其來(lái)源一般可分為：

  1. 純化的天然蛋白質(zhì)

  天然蛋白經(jīng)過(guò)修飾，具有線(xiàn)性表位和結(jié)構(gòu)表達(dá)，結(jié)構(gòu)相對(duì)來(lái)說(shuō)，比較復(fù)雜，屬于比較理想的抗原。但由于天然蛋白純化要求比較高，難以獲得高純度的天然蛋白，會(huì)影響免疫和抗體純化。因此一般只選擇在機(jī)體內(nèi)表達(dá)量比較高的蛋白作為抗原。

  2. 純化的重組蛋白

  重組蛋白純化技術(shù)比較多，容易獲得高純度的蛋白，并且種類(lèi)、結(jié)構(gòu)容易檢測(cè)。選擇重組蛋白要清楚這些蛋白是否帶有標(biāo)簽，因?yàn)闉榱朔奖慵兓亟M蛋白，一般會(huì)添加一些標(biāo)簽，比如GST、His、Myc、Fc、Flag等。這些帶標(biāo)簽的抗原在免疫動(dòng)物體內(nèi)戶(hù)產(chǎn)品帶有標(biāo)簽的抗體，需要在抗體純化過(guò)程中將這些標(biāo)簽去掉。

  3. 人工合成的多肽

  合成的多肽可以在不同的區(qū)域作為抗原進(jìn)行免疫。

  4. 小分子物質(zhì)

  分子量大小一般不會(huì)超過(guò)1000 Da，但小于300 Da就難以獲得高親和力的抗體，因此常會(huì)鏈接載體后才會(huì)進(jìn)行動(dòng)物免疫。

  5. 組織、全細(xì)胞或細(xì)胞組分

  有時(shí)由于抗原靶點(diǎn)不清楚，會(huì)選擇組織、全細(xì)胞或細(xì)胞組分作為抗原進(jìn)行動(dòng)物免疫。如果以組織作為抗原，則需要切除新鮮的組織，用生理鹽水洗干凈，然后用濾網(wǎng)和研杵將其分離成單個(gè)細(xì)胞。

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