【古朵生物】怎么樣來選擇適合你實(shí)驗(yàn)的Elisa試劑盒?

  ELISA試劑盒在實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)相當(dāng)普及，絕大多數(shù)ELISA試劑盒都是用于檢測未知樣本中抗原的濃度。用試劑盒當(dāng)然比自己慢慢摸條件快得多，ELISA試劑盒不僅可以讓實(shí)驗(yàn)便利，往往還加?，F(xiàn)在市面上的ELISA試劑盒既有國產(chǎn)也有進(jìn)口，數(shù)量繁多令人目不暇接，怎樣才能選出適用的產(chǎn)品呢?首先當(dāng)然得根據(jù)我們所要檢測的分子進(jìn)行檢測，除此以外也還有一些需要加以考量的因素。

  步、明確檢測何種蛋白。

  第二步、明確編碼該蛋白的基因與其它哪些物種同源性好。

  第三步、尋找檢測這些物種蛋白的試劑盒。

  第四步、咨詢商家ELISA是試劑盒使用的抗體類型：多抗還是單抗? 單抗是針對什么抗原決定簇的?

  第五步、 做出自己的判斷該買哪個(gè)試劑盒。

  從Elisa試劑盒的靈敏度、特異性、度、準(zhǔn)確度、簡便性、安全性及經(jīng)濟(jì)性全面評價(jià)：

  靈敏度：① 為試劑檢出被檢物質(zhì)的低量的能力;② 為試劑對大量樣品中陽性檢出的能力;

  特異性：常用交叉反應(yīng)率表示。含有與待測物相近結(jié)構(gòu)部份的物質(zhì)可能存在交叉反應(yīng)，使測定結(jié)果升高，可能導(dǎo)致假陽性，所以交叉反應(yīng)是評價(jià)其質(zhì)量的關(guān)鍵指標(biāo);

  度：ELISA試劑一般指其批內(nèi)CV%，其值應(yīng)小于15%;定量試劑應(yīng)同時(shí)考察線性范圍;

  準(zhǔn)確度：通過添加回收實(shí)驗(yàn)進(jìn)行評價(jià);

  簡便性：指在不影響試劑的前三項(xiàng)指標(biāo)的前題下，實(shí)驗(yàn)和測定步驟越少越好，在定性實(shí)驗(yàn)中結(jié)果判斷簡單明了，定量試驗(yàn)結(jié)果計(jì)算也應(yīng)簡單;

  安全性：指試劑對操作者和環(huán)境安全無害無傳染性;

  經(jīng)濟(jì)性：試劑在同等質(zhì)量條件下通過大規(guī)模生產(chǎn)或技術(shù)進(jìn)步降低成本，而市場價(jià)格比較合理;

  試劑評價(jià)：需要有權(quán)威的確證方法和確證的樣品進(jìn)行檢測。

  根據(jù)實(shí)驗(yàn)類型、抗體類型、交叉反應(yīng)、檢測方式來選擇Elisa試劑盒

  實(shí)驗(yàn)類型：

  ELISA 試劑盒有多種類型，不過它們都有一個(gè)共同特點(diǎn)，就是進(jìn)行抗原捕獲。一般捕獲形式包括將抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗體進(jìn)行捕獲。In-cell ELISA和酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)ELISPOT是兩種特殊的類型，In-cell ELISA需要將微孔板中培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行固定和通透化，然后再用抗體原位檢測。ELISPOT有點(diǎn)像蛋白印跡Western blot，先在帶膜的微孔板中培養(yǎng)細(xì)胞，然后在膜上檢測細(xì)胞分泌的抗原形成斑點(diǎn)。此外，我們還需要根據(jù)自身需要選擇96孔板或是384孔板進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)。

  通常人們使用雙抗夾心法進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)，雙抗夾心法中抗原被夾在捕獲抗體和檢測抗體之間，這種方法既靈敏又有效，受到了許多研究者的青睞。不過有時(shí)候雙抗夾心法并不是佳選擇，例如有時(shí)候抗原特別小讓兩個(gè)大抗體難以附著，又或者抗體只有一個(gè)抗體結(jié)合位點(diǎn)。在上述情況下，競爭性ELISA就為適用，這種方法是采用帶標(biāo)記的純化抗原與樣本中無標(biāo)記的抗原進(jìn)行競爭，以結(jié)合捕獲抗體。

  抗體類型

  單克隆抗體和多克隆抗體都能夠用于ELISA，實(shí)際上有時(shí)候二者結(jié)合。例如，對于雙抗夾心法而言，用多抗進(jìn)行捕獲而單抗進(jìn)行檢測有時(shí)有幫助。多抗能夠確保捕獲所有抗原，隨后單抗再特異性檢測擁有特定抗原表位的抗原。

  雙抗夾心法ELISA中捕獲抗體與檢測抗體(不論多抗還是單抗)的配對很有講究。我們不希望捕獲抗體與檢測抗體競爭抗原上的同一位點(diǎn)，為此我們就需要確保捕獲抗體和檢測抗體所識別的抗原表位不存在重疊。如果捕獲抗體和檢測抗體之間發(fā)生了沖突，就會對實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生較大影響。要避免這一問題，我們可以選擇購買 “matched pair”的捕獲/檢測抗體對，這些打包在一起的抗體是商家經(jīng)過驗(yàn)證才推薦的好組合，

  交叉反應(yīng)

  如果抗體間發(fā)生沖突或交叉反應(yīng)就會影響整個(gè)實(shí)驗(yàn)的特異性。其中抗體來源所帶來的兼容性就是交叉反應(yīng)的一個(gè)因素。盡管現(xiàn)在購買源自動(dòng)物的抗體越來越容易，我們?nèi)杂斜匾_認(rèn)一下是否會產(chǎn)生交叉反應(yīng)的問題。在用雙抗夾心法進(jìn)行ELISA檢測時(shí)，檢測用的二抗必須特異性針對檢測一抗，而不能與捕獲抗體起反應(yīng)。如果檢測用二抗與捕獲抗體結(jié)合，實(shí)驗(yàn)特異性就會大打折扣。通常我們選用源自不同宿主的捕獲抗體和檢測一抗，來避免上述問題。

  與此同時(shí)，了解試劑盒中提供的buffer也是有必要的(例如washing buffer和blocking buffer)，以免這些buffer含有可能影響抗原抗體相互作用的組分，使檢測結(jié)果收到影響。

  檢測方式

  如今檢測ELISA有許多途徑，我們可以根據(jù)自己的偏好進(jìn)行選擇。一般ELISA檢測的是酶促反應(yīng)的可溶性產(chǎn)物，抗體上結(jié)合有相應(yīng)的酶(例如通常使用的辣根過氧化物酶HRP)，而反應(yīng)體系中添加有相應(yīng)的底物(如3，3-二氨基聯(lián)苯胺DAB)。這種酶促反應(yīng)生成具有特征性的顏色，可以通過分光光度計(jì)進(jìn)行檢測，堿性磷酸酶AP也是一種常用酶。酶可以結(jié)合在一抗上，也可以結(jié)合在二抗上，還可以使用鏈霉親和素標(biāo)記的酶與親和素標(biāo)記的一抗結(jié)合。此外ELISA的結(jié)果檢測還包括放射性檢測、熒光檢測、化學(xué)發(fā)光或顯色法檢測等。

  抗體 ELISA 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵(lì)志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個(gè)國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。