古朵生物：ELISA檢測試驗(yàn)四種常用方法的優(yōu)缺點(diǎn)

  ELISA是一種廣泛應(yīng)用在測定液體樣本中的蛋白、抗體、或激素的免疫分析技術(shù)。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)程序，通常是把蛋白、抗體、或激素等(即抗原)直接或是以捕捉抗體(capture Ab)固定在固相載體上，再加入一級檢測抗體(primarydetection Ab)，形成一個(gè)抗原抗體的復(fù)合物。如果該抗體已經(jīng)用酶(enzyme)標(biāo)記了，即可用來直接測定抗原的量，若無，則可利用另一個(gè)酶標(biāo)記的二級抗體來測定抗原的量。測定抗原量的方法是加入該酶的底質(zhì)(substrate)，作用后產(chǎn)生出現(xiàn)的顏色深淺和樣本中的抗原量呈正比的關(guān)系，依此原理計(jì)算出樣本中的抗原總量或濃度。

  1.直接法(direct ELISA)

  將抗原直接固定在固相載體上，加入酶標(biāo)記的一級抗體，即可測定抗原總量，此一級抗體的特異性非常重要。

  優(yōu)勢：操作手續(xù)簡短，因無須使用二抗可避免交互反應(yīng)。

  缺點(diǎn)：試驗(yàn)中的一抗都得用酶標(biāo)記，但不是每種抗體都適合做標(biāo)記，費(fèi)用相對提高。

  2.間接法(indirect ELISA)

  此測定方法與直接法類似，差別在于一級抗體沒有酶標(biāo)記，改用酶標(biāo)記的二級抗體去辨識一級抗體來測定抗原量。

  優(yōu)勢：二抗可以加強(qiáng)信號，而且有多種選擇能做不同的測定分析。不加酶標(biāo)記的一級抗體則能保留它多的免疫反應(yīng)性。

  缺點(diǎn)：交互反應(yīng)發(fā)生的機(jī)率較高。

  3.雙抗體夾心法(sandwich ELISA)

  被檢測的抗原包被在兩個(gè)抗體之間，其中一個(gè)抗體將抗原固定于固相載體上，即捕捉抗體。另一個(gè)則是檢測抗體，此抗體可用酶標(biāo)記后直接測定抗原的量;或不標(biāo)記，再透過酶標(biāo)記的二級抗體來測定抗原的量。這兩種抗體必須小心選取，才可避免交互反應(yīng)或競爭相同的抗原結(jié)合部位。

  優(yōu)勢：高靈敏、高專一性，抗原無須事先純化。

  缺點(diǎn)：抗原一定得擁有兩個(gè)以上的抗體結(jié)合部位。

  4.競爭法(competitive ELISA)

  樣本里的抗原(自由抗原)和純化并固定在固相載體上的抗原(固定抗原)一起競爭相同的抗體，當(dāng)樣品里的自由抗原越多，就可以結(jié)合越多的抗體，而固定抗原就只能結(jié)合到較少的抗體，反之亦然。經(jīng)清洗步驟，洗去自由抗原和抗體的復(fù)合物，只留下固定抗原和抗體的復(fù)合物，拿來與只有固定抗原的對照組結(jié)果相比較，根據(jù)呈色差異就可計(jì)算出樣品里的抗原含量。

  優(yōu)勢：可適用比較不純的樣本，而且數(shù)據(jù)再現(xiàn)性很高。

  缺點(diǎn)：整體的敏感性和專一性都較差。

  新ELISA技術(shù)：

  基于細(xì)胞法(cell-based ELISA)：

  是一種新的定性蛋白檢測技術(shù)，將細(xì)胞直接在微孔板里培養(yǎng)，待檢測時(shí)，不需抽提蛋白和裂解細(xì)胞，便可直接測量微孔板里蛋白經(jīng)刺激或抑制作用后的變化。

  優(yōu)勢：無需裂解細(xì)胞，所以目標(biāo)蛋白損失少，可測定完整細(xì)胞、黏附細(xì)胞、還有非粘附細(xì)胞。

  缺點(diǎn)：不能測定抗原量。

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