古朵闡述：多重免疫熒光串色的因素

  隨著TSA試劑盒(酪胺信號放大技術)的興起，多個marker的標記不再是難題，比如CD4 CD8 CD68 CD56 a-SMA 這幾個marker的多重免疫熒光組合，能突破傳統(tǒng)方法的限制，實現(xiàn)這個組合的同一張切片上的同時標記，但是，要想順利得到理想的結果，還需要解決一些問題，其中大部分人都會面臨一個比較突出的問題：串色。

  出現(xiàn)串色，到底是哪些方面原因導致的?下面根據古朵技術的一些經驗簡單列舉一下：

  1 染料本身激發(fā)波長發(fā)射波長相隔太近 比如 alexa flour568 和alexa flour 555就很難區(qū)分開 (通過目前的一些成像設備很難區(qū)分開兩種熒光)

  2 成像設備的一些局限 比如熒光顯微鏡的濾光片 波長比較近，比如cy3濾光片 和texred或者tritc濾光片 cy5濾光片&CY5.5濾光片 會有串色

  3 當染料本身的問題 以及硬件問題都解決了后 可能還會出現(xiàn)串色，這個就屬于染色強度不匹配的問題了，比如綠光 曝光2ms(強信號) 紅光曝光50ms(弱信號) 這個時候很有可能綠光的信號會延伸至紅光

  4  除了以上這些問題 還有可能就是操作失誤導致的串色 比如CD4標記后 第二輪修復時做CD8指標時 修復強度不夠(未能將CD4在上一輪形成的 一抗二抗hrp復合體完全洗脫掉)這個時候也有可能形成明顯的串色 比如CD8 除了有真實的CD8表達 還會有一部分CD4 表達 形成了假陽性CD4(實為CD8的影子)

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