免疫熒光雙標技術HE染色的原理

  免疫熒光雙標技術稱HE染色原理，根據(jù)易于被堿性或酸性染料著色的性質稱為嗜堿性( basophilia )和嗜酸性( acidophilia );而對堿性染料和酸性染料親和力都比較弱的現(xiàn)象稱為中性(neutrophilia)。構成組織內蛋白質的氨基酸的種類很多，它們有不同的等電點。在普通染色法中，染色液的酸堿度為pH6左右，細胞內的酸性物質如細胞核的染色質、腺細胞和神經細胞內的粗面內質網(wǎng)及透明軟骨基質等均被堿性染料染色，這些物質稱為嗜堿性。

  免疫熒光雙標技術而細胞質中的其它蛋白質如紅細胞中的血紅蛋白、嗜酸粒細胞的顆粒及膠原纖維和肌纖維等被酸性染料染色，這些物質稱為嗜酸型。如果改變染色液的酸堿度，pH值升高時，則原來被酸性染料染色的物質可變?yōu)槭葔A性;pH值降低時，原來被堿性染料染色的物質則可變?yōu)槭人嵝浴?

  免疫熒光雙標技術所以說染色液的pH值可以影響染色的反應。脫氧核糖核酸(DNA)兩條鏈上的磷酸基向外，帶負電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木精堿性染料以離子鍵結合而被染色。蘇木精在堿性溶液中呈藍色，所以細胞核被染成藍色。

  免疫熒光染色需要注意的知識：

  (1)古朵生物提醒：由于熒光容易淬滅，一般僅能維持幾個小時，因此，熒光二抗應避光保存，即從加入熒光二抗以后的步驟中都要盡量避光操作。封片后應盡早照相，目前有市售的熒光增強劑，可使熒光在4℃保存1-2周仍不淬滅。

  (2) 免疫熒光染色常用的熒光素有以下幾種，綠色熒光：FITC、 Alexa Fluor 488和GFP;紅色熒光：TRITC、Cy3、Alexa Fluor 568&594和MitoTrackerRed;藍色熒光：Hoechst、DAPI;黃色熒光：YFP、Fluo-3和Rhoda-minel23等。

  (3)陜西依科生物提醒，不同的熒光素激發(fā)的波長不同，因此，選用濾光片時要注意。一般紫外線的激發(fā)波長為334-365nm，藍光的激發(fā)波長為435-490nm，綠光的激發(fā)波長為546nm左右。

  (4) 熒光顯微鏡應提前至少15min打開汞燈預熱。關閉30min后方可再開啟。

  上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術相關產品，勵志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產品遠銷多個國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向，不斷開發(fā)高質量的新產品，提供客戶滿意的綜合服務質量"的方針。