古朵闡述：關(guān)于ELISA試劑盒樣本的大致處理辦法

  一、液體樣本

  ELISA試劑盒液體樣本處理準(zhǔn)則：一切的液體樣本，用無菌管搜集，2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)，假如今后碰到其他的液體樣本，也按這個(gè)辦法，納入?yún)R總表。

  1、血清：用無菌管搜集，室溫血液自然凝結(jié)10-20分鐘，2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)，細(xì)心搜集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉積，應(yīng)再次離心。

  2、血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、肝素鈉或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)，細(xì)心搜集上清，保存過程中如有沉積構(gòu)成，應(yīng)該再次離心。

  3、尿液：用無菌管搜集，2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。細(xì)心搜集上清，保存過程中如有沉積構(gòu)成，應(yīng)再次離心。

  4、胸腹水：用無菌管搜集，2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)，細(xì)心搜集上清，保存過程中如有沉積構(gòu)成，應(yīng)再次離心。

  5、腦脊液：用無菌管搜集，2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)，細(xì)心搜集上清，保存過程中如有沉積構(gòu)成，應(yīng)再次離心。

  6、唾液：用無菌管搜集，2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)，細(xì)心搜集上清，保存過程中如有沉積構(gòu)成，應(yīng)再次離心。

  7、細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)排泄性的成份時(shí)，用無菌管搜集。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)，細(xì)心搜集上清，保存過程中如有沉積構(gòu)成，應(yīng)再次離心。

  8、牛奶：用無菌管搜集，2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)，細(xì)心搜集上清，保存過程中如有沉積構(gòu)成，應(yīng)再次離心。

  9、蜂蜜：用無菌管搜集，2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)，細(xì)心搜集上清，保存過程中如有沉積構(gòu)成，應(yīng)再次離心。

  10、全血：用含有抗凝劑的無菌管搜集，當(dāng)即輕輕搖擺，來回輕輕倒置數(shù)次，使血液和抗凝劑混勻，以防血液凝結(jié)。

  二、固體樣本

  ELISA試劑盒固體樣本處理準(zhǔn)則：稱取1g的固體樣本，用9g的適宜緩沖液溶解，排泄蛋白可以直接離心取上清檢測(cè)，細(xì)胞內(nèi)的蛋白，要先搜集細(xì)胞，再用適宜辦法破碎，離心取上清測(cè)驗(yàn)。

  1、安排標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取1g安排，參加9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手藝或勻漿器將標(biāo)本勻漿充沛。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)，細(xì)心搜集上清。分裝一份待檢測(cè)，其他冷凍備用，保存過程中如有沉積構(gòu)成，應(yīng)再次離心。關(guān)于植物安排，不好勻漿的話，就在液氮中充沛研磨;

  2、細(xì)胞內(nèi)蛋白樣本

  許多待測(cè)蛋白不是排泄蛋白，而是存在于細(xì)胞內(nèi)的蛋白，這個(gè)時(shí)候，要先搜集細(xì)胞，洗刷干凈，再破碎細(xì)胞，離心取上清。

  (1)培養(yǎng)的細(xì)胞

  A、動(dòng)物細(xì)胞：用PH7.2-7.4的PBS稀釋細(xì)胞懸液，使細(xì)胞濃度到達(dá)100萬/ml左右。經(jīng)過重復(fù)凍融(假如重復(fù)凍融，破碎作用不好，就采用超聲波破碎)，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)，細(xì)心搜集上清，保存過程中如有沉積構(gòu)成，應(yīng)再次離心。

  B、植物細(xì)胞：用PH7.2-7.4的PBS稀釋細(xì)胞懸液，使細(xì)胞濃度到達(dá)100萬/ml左右，置于冰盒上，用超聲破碎儀，設(shè)置破碎2s，冷卻30s的方法，充沛破碎細(xì)胞，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)，細(xì)心搜集上清，保存過程中如有沉積構(gòu)成，應(yīng)再次離心。

  (2)安排的細(xì)胞

  切割標(biāo)本后，稱取1g安排，參加9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手藝或勻漿器將標(biāo)本勻漿充沛。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)，去除上清，再用pH7.2-7.4左右的PBS小心洗刷沉積的細(xì)胞三遍。再用上述的細(xì)胞破碎辦法破碎細(xì)胞。

  3、土壤：稱取1g土壤，參加9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手藝將標(biāo)本充沛混勻。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)，細(xì)心搜集上清。分裝一份待檢測(cè)，其他冷凍備用，保存過程中如有沉積構(gòu)成，應(yīng)再次離心。假如是測(cè)排泄蛋白，直接取上清檢測(cè)，測(cè)驗(yàn)細(xì)胞內(nèi)蛋白，要破碎細(xì)胞。

  4、咽拭子：參加2g的pH7.2-7.4左右的PBS，溶解咽拭子頭部，搖勻，用鑷子取出咽拭子并擠干液體，2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)，細(xì)心搜集上清。分裝一份待檢測(cè)，其他冷凍備用，保存過程中如有沉積構(gòu)成，應(yīng)再次離心。假如是測(cè)排泄蛋白，直接取上清檢測(cè)，測(cè)驗(yàn)細(xì)胞內(nèi)蛋白，要破碎細(xì)胞。

  5.植物標(biāo)本中相關(guān)酶或蛋白的測(cè)定：(粗提取)

  1、新鮮植物安排請(qǐng)?jiān)谝旱谐渑嫜心?

  2、參加樣品體積9倍的提取液(pH?7.4?PBS緩沖液),3、?請(qǐng)于4度，8000rpm，離心30分鐘，取上清并暫時(shí)保存于4度待用。

  三、ELISA試劑盒樣本搜集注意事項(xiàng)

  1、不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

  2、標(biāo)本收集后趕快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，若不能馬上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)防止重復(fù)凍融。

  3、咱們羅列的是通用的樣本處理辦法，無法涵蓋各種樣本，關(guān)于一些特殊樣本，主張實(shí)驗(yàn)人員多參閱已宣布的文獻(xiàn)，自行設(shè)計(jì)合理的樣本處理辦法。

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