人白介素ELISA試劑盒標(biāo)本保存中的幾個問題

  白介素ELISA試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測技術(shù)。特異性抗人 IL-1α 單克隆抗體預(yù)包被在高 親和力的酶標(biāo)板上。酶標(biāo)板孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本和生ws化的檢測抗體，經(jīng)過孵育，樣本 中存在的 IL-1α 與固相抗體和檢測抗體結(jié)合。洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)后，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素(streptavidin-HRP)。洗滌后，加入顯色底物 TMB，避光顯色。顏色反應(yīng)的深淺與 樣本中 IL-1α 的濃度成正比。加入終止液終止反應(yīng)，在 450 nm 波長(參考波長 570 - 630 nm)測定吸 光度值。

  人白介素ELISA試劑盒標(biāo)本保存中的幾個問題：

  一、標(biāo)本保存不當(dāng)

  在冰箱中保存過久的標(biāo)本，血清中IgG可聚合成多聚體、AFP可形成二聚體，在間接法ELISA測定中會導(dǎo)致本底過深、甚至造成假陽性;標(biāo)本放置時間過長(如一天以上)，有時抗原或抗體免疫活性減弱，亦可出現(xiàn)假陰性。為克服上述干擾，ELISA測定的血清標(biāo)本宜為新鮮采集;如不能立即測定，5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可存放于4℃，1周后測定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存;凍存后融解的標(biāo)本，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混合后再測定，但混勻時應(yīng)輕柔，不可強烈振蕩。

  二、標(biāo)本溶血

  由于各種人為原因引起的標(biāo)本溶血，均可因紅細胞破壞溶解時釋放出大量具有過氧化物酶活性的血紅蛋白，在以辣根過氧化物酶為標(biāo)記的ELISA測定中，會導(dǎo)致非特異性顯色，ELISA試劑盒干擾測定結(jié)果。為克服上述干擾作用，標(biāo)本采集時必須注意避免溶血。

  三、標(biāo)本凝集不全

  在沒有促凝劑和抗凝劑存在的情況下，正常血液采集后1/2~2h開始凝固，18~24h*凝固。臨床檢驗工作中，有時為了爭取時間快速檢測，常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清，此時的血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結(jié)果;這類情況于次日復(fù)查時因血凝已*，血清中不再有纖維蛋白原存在，故復(fù)查結(jié)果變?yōu)殛幮?。為避免上述干擾作用，解決的辦法是血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清，或標(biāo)本采集時用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當(dāng)?shù)拇倌齽?

  四、標(biāo)本管中添加物質(zhì)的影響

  抗凝劑、酶抑制劑及快速分離血清的分離膠等均對ELISA測定有一定干擾作用。

  五、標(biāo)本受細菌污染

  因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶，因此，被細菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣，亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結(jié)果。

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