古朵快訊：雌二醇Elisa試劑盒的樣本處理要求

  雌二醇Elisa試劑盒是一種基于競爭法原理的固相酶免吸附實驗(ELISA)。反應(yīng)板上的微檢測孔包被有能結(jié)合雌二醇分子上獨特抗原位點的單克隆抗體。一份含有內(nèi)源性雌二醇的病人樣本與辣根過氧酶標(biāo)記的雌二醇競爭性的結(jié)合包被板上的抗體。溫育之后，未結(jié)合的酶聯(lián)物用洗滌液洗去。過氧酶與包被抗體的結(jié)合量與樣品中雌二醇的濃度成反比。加入底物液后，所顯示的顏色強度與病人樣品中雌二醇的濃度成反比。

  雌二醇Elisa試劑盒樣本處理及要求：

  1.血清：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

  2.血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

  3.組織勻漿：用預(yù)冷的PBS(0.01M,pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會影響測量結(jié)果)，稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加

  入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細(xì)胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復(fù)凍融。后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。

  雌二醇Elisa試劑盒的結(jié)果計算：

  1.計算每個標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和病人樣本的平均吸光度值。

  2.用吸光度值作為縱坐標(biāo)(y)，濃度值作為橫坐標(biāo)(x)，以每個標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值對其相應(yīng)的濃度值進行標(biāo)繪，作一標(biāo)準(zhǔn)曲線。

  3.用每一樣品的平均吸光度值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上確定其相應(yīng)的濃度。

  4.自動計算方法：在IFU上，它用四參數(shù)曲線已自動計算出結(jié)果。其它的歸納方法可能會得出稍微不同的結(jié)果。

  5.樣品的濃度可直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取。樣品中HPL濃度高于高標(biāo)準(zhǔn)品的必須用進行進一步的稀釋。在計算樣品濃度時就應(yīng)當(dāng)把此稀釋因子考慮進去。

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