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使用色譜柱須留意的一些細節(jié)
發(fā)布時間:2018-03-29瀏覽次數(shù):2078返回列表
色譜柱由柱管、壓帽、卡套(密封環(huán))、篩板(濾片)、接頭、螺絲等組成。柱管多用不銹鋼制成,壓力不高于70 kg/cm2 時,也可采用厚壁玻璃或石英管,管內(nèi)壁要求有很高的光潔度。為提高柱效,減小管壁效應,不銹鋼柱內(nèi)壁多經(jīng)過拋光。也有人在不銹鋼柱內(nèi)壁涂敷氟塑料以提高內(nèi)壁的光潔度,其效果與拋光相同。還有使用熔融硅或玻璃襯里的,用于細管柱。色譜柱兩端的柱接頭內(nèi)裝有篩板,是燒結(jié)不銹鋼或鈦合金,孔徑0.2~20μm(5~10&μm),取決于填料粒度,目的是防止填料漏出。北京綠百草科技發(fā)展有限公司技術(shù)人員建議,使用色譜柱須留意下列的一些細節(jié):
1、將色譜柱接到色譜儀之前,必須先用合適的溶劑沖洗流路(包括流通閥和定量環(huán))。 如之前是反相系統(tǒng),先用水把系統(tǒng)中可能含有的鹽沖洗干凈,再用異丙醇以2ml/min沖洗1小時左右,再接色譜柱。
2、有些溶劑(比如丙酮、氯仿、DMF、二甲基亞砜、乙酸乙酯、二氯甲烷、THF)會破壞手性固定相,應禁用。
3、如果使用的是自動進樣器,進樣間隔的沖洗液也必須更換成合適的溶劑。
4、接色譜柱之前,充分沖洗系統(tǒng)。
5、避免使用除正己烷,異丙醇,乙醇之外的其他溶劑,如樣品中含有其他溶劑也需注意。
6、壓力建議在50Bar以下,高不能超過100Bar。
7、樣品檢測前需仔細詢問送樣人員樣品中可能含有的溶劑,如果工藝中用到丙酮、氯仿、DMF、二甲基亞砜、乙酸乙酯、二氯甲烷、THF,則需盡量烘干。樣品盡量溶解在流動相中,并用0.45μm濾膜過濾。不能使用強堿性物質(zhì)作為流動相添加劑或者溶解樣品,因為這樣會損壞填料中的硅膠成分。
8、如果系統(tǒng)中或者色譜柱中含較高濃度的異丙醇或者乙醇時,由于他們的粘度比較大,平衡色譜柱時需特別注意壓力變化,可采用低流速平衡,當柱壓下降后再逐漸升高至要求的流速。
9、樣品檢測完畢,用無水乙醇清洗色譜柱,以0.5ml/min沖洗3個小時。用無水乙醇柱壓會比較高,所以流速不能過高,沖洗過程中注意壓力變化,如超過50bar,則把流速降至0.3ml/min,并適當延長沖洗時間。
10、若色譜柱處于長期閑置狀態(tài)時,要將色譜柱沖洗,建議沖洗3-4小時以上,后保存在純有機試劑或高比例的有機試劑溶液(如90%甲醇水)中。