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PCR基因擴增儀的工作原理

發(fā)布時間:2020-06-20瀏覽次數(shù):1262返回列表

PCR技術(shù)的原理類似于DNA的天然復制過程,其特異性依賴于靶序列兩端互補的寡核苷酸引物,由變性-退火-延伸三個基本反應步驟構(gòu)成。

1. 模板DNA的變性

模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時間后,使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結(jié)合,為下輪反應作準備。


2. 模板DNA與引物的退火(復性)

模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈互補序列配對結(jié)合。


3. 引物的延伸

DNA模板-引物結(jié)合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP為反應原料,靶序列為模板,按堿基配對與半保留復制原理,合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保留復制鏈。


重復循環(huán)變性-退火-延伸三過程,就可獲得多的“半保留復制鏈”,而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一輪循環(huán)需2~4分鐘,如此反復進行,每一輪循環(huán)所產(chǎn)生的DNA均能成為下一輪循環(huán)的模板,每一輪循環(huán)都使兩條人工合成的引物間的DNA特異區(qū)拷貝數(shù)擴增1倍,PCR產(chǎn)物以2的指數(shù)形式迅速擴增,經(jīng)過25~30輪循環(huán)后(2~3小時),理論上可使基因擴增109倍以上,實際上一般可達106~107倍。



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