上海高創(chuàng)化學(xué)科技有限公司，是一家專注于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域的高科技企業(yè)，是國(guó)內(nèi)代理銷售生物試劑、儀器的知名公司之一。公司本著為顧客服務(wù)、為科研服務(wù)的宗旨，為中國(guó)的專家和學(xué)者提供種類齊全的高品質(zhì)產(chǎn)品。希美公司已與多家歐美著名生物技術(shù)公司簽訂獨(dú)家或區(qū)域代理協(xié)議，銷售的實(shí)驗(yàn)儀器、消耗品、分子生化試劑、免疫試劑和細(xì)胞培養(yǎng)試劑等，已被廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)基礎(chǔ)研究、開發(fā)應(yīng)用、制藥、疾病診斷與控制、人口與健康、生物技術(shù)等諸多領(lǐng)域。客戶遍布大學(xué)、研究所、醫(yī)院、衛(wèi)生防疫、商品檢驗(yàn)檢疫、制藥公司、生物技術(shù)公司和食品工業(yè)等單位。主要產(chǎn)品包括：英國(guó)Randox-lifesciences公司的藥物殘留ELISA試劑盒、抗體抗體蛋白;挪威Biosese公司的檢測(cè)表面活性劑、農(nóng)藥殘留、毒素、PCB等相關(guān)有害物質(zhì)的ELISA檢測(cè)試劑盒以及魚類蛋白和抗體;Gibco公司DMEM培養(yǎng)基、1640培養(yǎng)基、F12培養(yǎng)基，MEM培養(yǎng)基、F10培養(yǎng)基等;Prospec-Tany公司的細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子、蛋白激酶、重組和天然蛋白、酶以及病毒抗原和抗體;美國(guó)eBioscience公司的流式細(xì)胞術(shù)產(chǎn)品等。

　　高創(chuàng)的宗旨是：為用戶提供“最高質(zhì)量的產(chǎn)品” 和 “最優(yōu)質(zhì)的服務(wù)”。

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人骨特異性堿性磷酸酶B(ALP-B)ELISA Kit Human Bone-specific Alkphase B,ALP-B ELISA Kit

人骨特異性堿性磷酸酶B(ALP-B)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒使用說明書

                                                                                 
本試劑盒僅供體外研究使用、不用于臨床診斷!
預(yù)期應(yīng)用
ELISA法定量測(cè)定人血清、血漿或其它相關(guān)生物液體中ALP-B含量。

實(shí)驗(yàn)原理
用純化的ALP-B抗體包被微孔板，制成固相載體，往微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的ALP-B抗體、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過徹底洗滌后用底物(TMB)顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的ALP-B呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度( 值)，計(jì)算樣品濃度。

試劑盒組成及試劑配制
1、 酶標(biāo)板：一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品)： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為20 U/L，然后做系列倍比稀釋(注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋)，分別配制成20 U/L，10 U/L，5 U/L，2.5 U/L，1.25 U/L，0.625 U/L，0.312 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制10 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.5ml (不要少于0.5ml )20 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
6、 檢測(cè)溶液A：1×120  /瓶(1:100)。臨用前以檢測(cè)稀釋液A 1:100稀釋(如：10ul檢測(cè)溶液A / 990 檢測(cè)稀釋液A)，充分混勻，稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制(100 /孔)，實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制  0.1-0.2ml。
7、 檢測(cè)溶液B：1×120  /瓶(1:100)。臨用前以檢測(cè)稀釋液B 1:100稀釋。稀釋方法同檢測(cè)溶液A。
8、 底物溶液：1×10ml/瓶。
9、 濃洗滌液：1×30ml/瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液：1×10ml/瓶(2 mol/L H2SO4)。
11、覆膜：5張
12、使用說明書：1份

自備物品
1、 酶標(biāo)儀(建議儀器使用前提前預(yù)熱)
2、 微量加液器及吸頭，EP管
3、 蒸餾水或去離子水，濾紙

標(biāo)本的采集及保存
1、 血清：全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4 過夜后于1000 g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20 或-80 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2、 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于 1000 g離心15分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20 或-80 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3、 其它生物標(biāo)本：請(qǐng)1000 g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20 或-80 保    存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
4、 樣本處理：血清或血漿標(biāo)本推薦稀釋10倍，如：稀釋10倍，取100uL血清或血漿加入900uL樣品稀釋液。標(biāo)本使用0.1 M 的PBS稀釋( PH=7.0-7.2)。
 
注：以上標(biāo)本均應(yīng)密封保存，4 保存應(yīng)小于1周，-20 不應(yīng)超過1個(gè)月，-80 不應(yīng)超過2個(gè)月；標(biāo)本溶血會(huì)影響后檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。

操作步驟
實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫，試劑不能直接在37 溶解；試劑或樣品配制時(shí)，均需充分混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1、 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液 100  ，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100 ，注意不要有氣泡，加樣 時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37 溫育2小時(shí)。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效
性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2、 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100 (臨用前配制)，酶標(biāo)板加上覆膜，37 溫育1小時(shí)。
3、 棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400 /每孔，甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4、 每孔加檢測(cè)溶液B工作液(臨用前配制)100 ，加上覆膜，37 溫育1小時(shí)。
5、 棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，方法同步驟3。
6、 每孔加底物溶液90 ，酶標(biāo)板加上覆膜37 避光顯色(反應(yīng)時(shí)間控制在15-30分鐘，當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4孔梯度不明顯時(shí)，即可終止)。
7、 每孔加終止溶液50 ，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物    液的加入順序相同。
8、 立即用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的光密度(OD值)。

注：
1、 試劑準(zhǔn)備：所有試劑在使用前應(yīng)平衡至室溫，使用后請(qǐng)立即按照說明書要求保存試劑。實(shí)驗(yàn)操作中請(qǐng)使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2、 加樣：加樣或加試劑時(shí)，一個(gè)孔與后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大，將會(huì)導(dǎo)致不同的 “預(yù)溫育”時(shí)間，從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時(shí)間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)控制在10分鐘內(nèi)。推薦設(shè)置復(fù)孔進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
3、 溫育：為防止樣品蒸發(fā)，實(shí)驗(yàn)時(shí)將加上蓋或覆膜的酶標(biāo)板置于濕盒內(nèi)，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài)；同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的溫育時(shí)間和溫度。
4、 洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5、 試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請(qǐng)手甩幾下或少時(shí)離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液、檢測(cè)溶液B工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配制使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請(qǐng)精確 配制標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配制(如吸取檢測(cè)溶液A時(shí)，一次不要小于10 )，以避免由于不準(zhǔn)確稀  釋而造成濃度誤差；請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液、檢測(cè)溶液B工作液。
6、 反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
7、 底物：底物請(qǐng)避光保存，在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
    
洗板方法
1、 手工洗板方法：將推薦的洗滌緩沖液至少0.4ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘，吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體，在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。
2、 自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中。

特異性
    本試劑盒可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的人ALP-B，且與其它相關(guān)蛋白無交叉反應(yīng)。

計(jì)算
  各標(biāo)準(zhǔn)品及樣本  值扣除空白孔  值后作圖(七點(diǎn)圖)，如設(shè)置復(fù)孔，則 應(yīng)取其平均值計(jì)算。以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為縱坐標(biāo)(對(duì)數(shù)坐標(biāo))， 值為橫坐標(biāo)(對(duì)數(shù)坐標(biāo))，在對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。推薦使用專業(yè)制作曲線軟件進(jìn)行分析，如 curve expert 1.3，根據(jù)樣品 值，由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度，乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與  值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程式，將樣品的  值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

檢測(cè)范圍：0.312 U/L - 20 U/L，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線請(qǐng)取用以下濃度值：20 U/L，10 U/L，5 U/L，2.5 U/L，1.25 U/L，0.625 U/L，0.312 U/L。

zui低檢測(cè)限：0.156 U/L

說明
1. 在儲(chǔ)存及孵育過程中避免將試劑暴露在強(qiáng)光中。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和污染，試劑避免受到微生物的污染，因?yàn)榈鞍姿饷傅母蓴_將導(dǎo)致出現(xiàn)錯(cuò)誤的結(jié)果。
2. 小心吸取試劑并嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度。請(qǐng)注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時(shí)，一個(gè)孔與后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大，將會(huì)導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育”時(shí)間，從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。而且，洗滌不充分將影響試驗(yàn)結(jié)果。
3. 試劑盒保存：部分試劑保存于-20℃，部分試劑保存于2-8℃，具體以標(biāo)簽上的標(biāo)示為準(zhǔn)。
4. 濃洗滌液會(huì)有鹽析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。
5. 剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會(huì)含有少許水樣物質(zhì)，此為正?，F(xiàn)象，不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響。
6. 中、英文說明書可能會(huì)有不一致之處，請(qǐng)以英文說明書為準(zhǔn)。
7. 所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測(cè)裝置。
8. 有效期：6個(gè)月