上海高創(chuàng)化學(xué)科技有限公司，是一家專注于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域的高科技企業(yè)，是國內(nèi)代理銷售生物試劑、儀器的知名公司之一。公司本著為顧客服務(wù)、為科研服務(wù)的宗旨，為中國的專家和學(xué)者提供種類齊全的高品質(zhì)產(chǎn)品。希美公司已與多家歐美著名生物技術(shù)公司簽訂獨家或區(qū)域代理協(xié)議，銷售的實驗儀器、消耗品、分子生化試劑、免疫試劑和細(xì)胞培養(yǎng)試劑等，已被廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)基礎(chǔ)研究、開發(fā)應(yīng)用、制藥、疾病診斷與控制、人口與健康、生物技術(shù)等諸多領(lǐng)域?？蛻舯椴即髮W(xué)、研究所、醫(yī)院、衛(wèi)生防疫、商品檢驗檢疫、制藥公司、生物技術(shù)公司和食品工業(yè)等單位。主要產(chǎn)品包括：英國Randox-lifesciences公司的藥物殘留ELISA試劑盒、抗體抗體蛋白;挪威Biosese公司的檢測表面活性劑、農(nóng)藥殘留、毒素、PCB等相關(guān)有害物質(zhì)的ELISA檢測試劑盒以及魚類蛋白和抗體;Gibco公司DMEM培養(yǎng)基、1640培養(yǎng)基、F12培養(yǎng)基，MEM培養(yǎng)基、F10培養(yǎng)基等;Prospec-Tany公司的細(xì)胞因子、生長因子、蛋白激酶、重組和天然蛋白、酶以及病毒抗原和抗體;美國eBioscience公司的流式細(xì)胞術(shù)產(chǎn)品等。

　　高創(chuàng)的宗旨是：為用戶提供“最高質(zhì)量的產(chǎn)品” 和 “最優(yōu)質(zhì)的服務(wù)”。

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人組胺(HIS)ELISA Kit human Histamine,HIS ELISA KIT
 

人組胺(Histamine)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用

檢測范圍：0.47 ng/ml -30 ng/ml
zui低檢測限：0.2 ng/ml
特異性：本試劑盒可檢測人組胺，且與其他相關(guān)抗體無交叉反應(yīng)。
有效期：6個月
預(yù)期應(yīng)用：ELISA法定量測定人血清、血漿或其它相關(guān)生物液體中組胺含量。
說明
1. 試劑盒保存：-20℃(較長時間不用時)；2-8℃(頻繁使用時)。
2. 濃洗滌液低溫保存會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。
3. 中、英文說明書可能會有不一致之處，請以英文說明書為準(zhǔn)。
4. 剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì)，此為正?，F(xiàn)象，不會對實驗結(jié)果造成任何影響。
實驗原理
用純化的人組胺包被酶標(biāo)板，制成固相載體。向微孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品以及辣根過氧化物酶標(biāo)記兔抗人組胺進行反應(yīng)，經(jīng)過徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的組胺呈負(fù)相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，計算樣品中抗體的含量。
試劑盒組成及試劑配制
1. 酶聯(lián)板(Assay plate )：                                         一塊(96孔)。
2. 樣品稀釋液(Sample Diluent)：                                     1×20ml/瓶。
3. 標(biāo)準(zhǔn)品                                                              2瓶。
4. 辣根過氧化物酶標(biāo)記兔抗人組胺稀釋液
(HRP-rabbit anti-human histamine Diluent)：                      1×10ml/瓶。
5. 辣根過氧化物酶標(biāo)記兔抗人組胺
(HRP-rabbit anti-human histamine)：                      1×60μl/瓶(1：100)。
6. 底物溶液(TMB Substrate)：                                     1×10ml/瓶。
7. 濃洗滌液(Wash Buffer)：           1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
8. 終止液(Stop Solution)：                               1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
需要而未提供的試劑和器材
1. 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀
2. 高速離心機
3. 電熱恒溫培養(yǎng)箱
4. 干凈的試管和Eppendof管
5. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，用多通道移液器
6. 蒸餾水，容量瓶等
標(biāo)本的采集及保存
1. 血清：全血標(biāo)本請于室溫放置2小時或室溫過夜后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注：標(biāo)本溶血會影響后檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進行此項檢測。
標(biāo)本的稀釋原則：
首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量，確定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍內(nèi)，檢測的結(jié)果才是準(zhǔn)確的。稀釋的過程中，應(yīng)做好詳細(xì)的記錄。后計算濃度時，稀釋了“N”倍，標(biāo)本的濃度應(yīng)再乘以“N”。
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200ng/ml，做系列倍比稀釋后，分別稀釋30 ng/ml，15ng/ml，7.5 ng/ml，3.75 ng/ml，1.87 ng/ml，0.94 ng/ml，0.47ng/ml樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0 ng/ml，臨用前15分鐘內(nèi)配制。
如配制15 ng/ml標(biāo)準(zhǔn)品：取0.5ml(不要少于0.5ml)30 ng/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
辣根過氧化物酶標(biāo)記兔抗人組胺的稀釋原則：
臨用前以辣根過氧化物酶標(biāo)記兔抗人組胺稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl)，實際配制時應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標(biāo)記兔抗人組胺加990μl辣根過氧化物酶標(biāo)記兔抗人組胺稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制。
操作步驟
實驗開始前，請?zhí)崆芭渲煤盟性噭?，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。
1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?0μl，余孔加待測樣品50μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，同時每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記兔抗人組胺工作液 50μl(取1μl酶標(biāo)記抗體加99μl酶標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制)。
2. 輕輕晃動混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)30分鐘。
3. 溫育后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，200μl/每孔，甩干。
4. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色(30分鐘內(nèi)，此時肉眼可見孔內(nèi)有明顯藍色，即可終止)。
5. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
6. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行檢測。
實驗備注
1. 用戶在初次使用試劑盒時，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到管底。
2. 每次實驗留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑，只是后加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調(diào)OD值至零。
3. 未使用完的酶標(biāo)板或者試劑，請于2-8℃保存。辣根過氧化物酶標(biāo)記兔抗人組胺工作液請依據(jù)所需的量配置使用。請勿重復(fù)使用已稀釋過的辣根過氧化物酶標(biāo)記兔抗人組胺工作液。
4. 建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
洗板方法
手工洗板方法：吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。
自動洗板：如果有自動洗板機，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
計算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)(對數(shù)坐標(biāo))，OD值為縱坐標(biāo)(普通坐標(biāo))，在半對數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
注意事項
1. 本操作說明適用于48T試劑盒，但48T試劑盒所有試劑減半。
2. 當(dāng)混合蛋白溶液時應(yīng)盡量輕緩，避免起泡。
3. 洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。
4. 一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
5. 如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數(shù)。
6. 在配制檢測溶液工作液時，請以相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。
7. 底物請避光保存。
8. 不要用其它生產(chǎn)廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。