BICR 56細(xì)胞,細(xì)胞株培養(yǎng)
發(fā)布時間:2016-05-04瀏覽次數(shù):811返回列表
產(chǎn)品名稱:BICR 56細(xì)胞,細(xì)胞株培養(yǎng)
中文名稱:人胚腎細(xì)胞;表達SV40T抗原人胚腎上皮細(xì)胞
規(guī)格:25T
形態(tài)特性:圓形
生長特性:懸浮生長
特征特性:該細(xì)胞穩(wěn)定表達SV40大T抗原,并且促進適病毒產(chǎn)物的產(chǎn)生。
培養(yǎng)條件:DMEM(HG)+500ug/mlG418+10%FBS
傳代方法:1:2傳代
庫存狀態(tài):素爾現(xiàn)貨
上海素爾生物提供400多種類細(xì)胞株細(xì)胞系,質(zhì)量穩(wěn)定,價格優(yōu)惠,傳代次數(shù)少,細(xì)胞狀態(tài)良好,飽滿,有光澤,提供多項細(xì)胞復(fù)蘇服務(wù),原代細(xì)胞和耐藥株的建立,細(xì)胞染色,STR分型鑒定。囊括歸納:1.細(xì)胞培養(yǎng)(代養(yǎng)細(xì)胞) 2.整體課題中細(xì)胞培養(yǎng) 3.MTT(1-48) 4.MTT(49-72) 5.MTT(73-96) 6.細(xì)胞凋亡檢測(普通) 7.細(xì)胞凋亡檢測(細(xì)胞有綠色熒光) 8.細(xì)胞周期檢測 9.質(zhì)粒轉(zhuǎn)染 10.平板克隆形成 11.細(xì)胞劃痕 12.transwell 13.transwell侵襲 14.ROS活性氧檢測 15.線粒體膜電位檢測。
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具體操作
一. 實驗前準(zhǔn)備:
1.將水浴鍋預(yù)熱至37℃
2.用75%酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺臺面。
3.在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養(yǎng)瓶等等。
二.取出凍存管:
1.根據(jù)細(xì)胞凍存記錄按標(biāo)簽找到所需細(xì)胞的編號。
2.從液氮罐中取出細(xì)胞盒,取出所需的細(xì)胞,同時核對管外的編號。
三.迅速解凍:
1.迅速將凍存管投入到已經(jīng)預(yù)熱的水浴鍋中迅速解凍,并要不斷的搖動,使管中的液體迅速融化。
2.約1-2min后凍存管內(nèi)液體完全溶解,取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁,再拿入超凈臺內(nèi)。
四.平衡離心:用架盤天平平衡后,放入離心機中3000r/min 離心3min
五.制備細(xì)胞懸液:
1.吸棄上清液。
2.向離心管內(nèi)加入10ml培養(yǎng)液,吹打制成細(xì)胞懸液。
六.細(xì)胞計數(shù):細(xì)胞濃度以5×105/ml為宜。
七.培養(yǎng)細(xì)胞將復(fù)合細(xì)胞計數(shù)要求的細(xì)胞懸液分裝入培養(yǎng)瓶內(nèi),將培養(yǎng)瓶放入37℃和5%CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)2-4小時(或者24-48小時)后換液繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng),換液的時間由細(xì)胞情況而定。
初學(xué)者易犯錯誤:
1水浴鍋未預(yù)熱或者未預(yù)熱到37℃。
2.水浴鍋內(nèi)凍存管太多,導(dǎo)致傳熱不佳,使融化時間延長。
3.離心前忘記平衡,導(dǎo)致離心機損壞和細(xì)胞丟失。
4.一次復(fù)蘇細(xì)胞過多,忘記更換吸頭和吸管,導(dǎo)致細(xì)胞交叉污染。
(另:冷凍細(xì)胞解凍程序)
2.1. 依據(jù)細(xì)胞株數(shù)據(jù)單之基礎(chǔ)培養(yǎng)基種類、血清種類和其它之成份和比例, 制備培養(yǎng)基。大多數(shù)之細(xì)胞均無法立即適應(yīng)不同之基礎(chǔ)培養(yǎng)基或不同之血清種類, 若因?qū)嶒炐枰?必須有所不同時, 務(wù)必以緩慢比例漸次改變培養(yǎng)基組成, 確定細(xì)胞適應(yīng)后, 方進行所需之實驗。
2.2. FBS (fetal bovine serum, 胚牛血清), CS (calf serum, 小牛血清)和HS (horse serum, 馬血清),對細(xì)胞而言差異大,請務(wù)必依據(jù)細(xì)胞株資料單之血清種類培養(yǎng)之。
2.3. 將培養(yǎng)基置于 37 °C水槽中回溫,回溫后噴以70 % 酒精并擦拭之, 移入無菌操作臺內(nèi)。取出冷凍管, 立即放入37 °C 水槽中快速解凍, 水面高度不可接近或高過冷凍管之蓋沿, 否則易發(fā)生污染。輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全部融化后, 以70 % ethanol 擦拭冷凍管外部, 移入無菌操作臺內(nèi)。
2.4. 依據(jù)細(xì)胞種類和濃度,于無菌操作臺內(nèi)取 10 ml培養(yǎng)基加至 T25或 T75 flask中。取出已解凍之細(xì)胞懸浮液,緩緩加入T25 或T75 flask 內(nèi)之培養(yǎng)基, 混 合均勻,放入37 °C,5 % CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
2.5. 對大多數(shù)細(xì)胞而言,1 % 以下之冷凍保護劑DMSO,不會對細(xì)胞之貼附或活化有不良影響,不需立刻由解凍細(xì)胞中去除,待第二天確定細(xì)胞生長或貼附良好后再去除即可。唯對少數(shù)因?qū)MSO 敏感或會造成細(xì)胞分化之細(xì)胞,需立即去除DMSO 者, 則可將解凍后之細(xì)胞懸浮液放入5 - 10 ml 培養(yǎng)基中,離心300 xg (約1000 rpm),5 分鐘,小心移去上清液,加入適量新鮮培養(yǎng)基,將細(xì)胞均勻混合后, 轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中, 再放入37 °C, 5 % CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。收到T25 flask 細(xì)胞時, 處理方式為︰
1. 于寄送過程中,為避免起泡造成細(xì)胞脫落死亡,T25 flask 均加滿培養(yǎng)基。請檢查flask 外觀,并于顯微鏡下觀察細(xì)胞生長狀況和有無污染現(xiàn)象,若有任何問題, 不要打開蓋子,請立即通知細(xì)胞實驗室。
2. 將原封之T25 flask 靜置于37 °C, 5 % CO2 培養(yǎng)箱中,使細(xì)胞回溫至37 °C, 并讓運送過程中少數(shù)脫落的細(xì)胞可再附著生長。隔天后,于無菌操作箱內(nèi)取出flask內(nèi)之培養(yǎng)基,(取出之培養(yǎng)基可以再使用),僅留約5-10ml 培養(yǎng)基于flask 內(nèi),依 一般培養(yǎng)方式再將細(xì)胞置入培養(yǎng)箱中或細(xì)胞已長滿盤, 則將細(xì)胞做傳代培養(yǎng)。
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