Sepax Polar-Propylamide色譜柱 益母草中水蘇堿分離專用柱。 Polar-Propy

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Sepax Polar-Propylamide色譜柱

益母草中水蘇堿分離專用柱。

Polar-Propylamide是為解決強(qiáng)極性藥物和小生物分子的分離而設(shè)計的一款親水作用色譜(HILIC)柱，以高純度具有良好機(jī)械穩(wěn)定性的硅膠為基質(zhì)，采用高純度的鍵合試劑，zui大限度實現(xiàn)硅膠表面覆蓋，確保了固定相的穩(wěn)定性。該填料為均一的球形顆粒，孔徑120Å，表面積300m2/g，由于鍵合了極性丙基酰胺基團(tuán)，Polar-Propylamide柱可為極強(qiáng)性的化合物提供良好的保留。通過運(yùn)用獨(dú)有的勻漿裝填技術(shù)裝填得到的HILIC柱柱床密度均一穩(wěn)定，可保證具有zui高的柱效。通過嚴(yán)格控制單分子層形成以及封尾的化學(xué)反應(yīng)條件，可確保柱與柱之間有著可靠的重現(xiàn)性。
色譜柱安裝與操作
色譜柱在運(yùn)輸過程中或在沒有使用時，它的兩端總是用堵頭進(jìn)行密封。當(dāng)將色譜柱接入色譜儀器系統(tǒng)時，首先移去兩端的堵頭。請注意將流動相流動的方向與柱上標(biāo)記的方向保持一致。除非出于特殊考慮，例如為了清除堵在色譜柱入口端的臟污等而需要將色譜柱反接以進(jìn)行沖洗時，建議用戶在接上色譜柱時一定要遵循柱上標(biāo)記的方向。由于色譜柱的連接是整個色譜操作過程的一部分，如果密封卡套過緊，或安裝不合適，或者密封卡套與色譜柱端口不匹配，都有可能導(dǎo)致溶液的泄漏。請按照下面步驟將色譜柱與密封卡套相連接，從而將色譜柱接入HPLC系統(tǒng)中：
(a)一次使用的管線，請依次將管線接頭和密封卡套裝在外徑1/16”的管線上。密封卡套的寬口端應(yīng)朝向管線接頭。
(b)將管線緊緊插入色譜柱的接口，向前滑動密封卡套和管線接頭，并使管線接頭的螺紋與色譜柱端口的螺紋相互銜接，然后擰緊管線接頭。如果管線為高分子材料，請轉(zhuǎn)到步驟(d)；如果是金屬管線，請繼續(xù)(c)。
(c)在用力將管線壓入柱端接口之后，用1/4”扳手將已擰緊的螺帽再進(jìn)一步緊固。
(d)對色譜柱的另一端采用上述方法進(jìn)行操作。
新的Polar-Propylamide柱中的液相是乙腈與水的混合溶液。在儲存和運(yùn)輸過程中，硅膠填料可能會干涸。這時推薦用10-20倍柱體積的純有機(jī)溶劑如甲醇、乙腈等進(jìn)行沖洗以活化色譜柱。接著可用用戶自己選擇的流動相沖洗色譜柱。流速由0.1mL/min逐漸升至所需的操作條件，直至基線穩(wěn)定為止。如果柱壓和基線波動較大，這可能是氣泡進(jìn)入了色譜柱中。這時可用較高流速沖洗色譜柱2-5分鐘， 例如4.6´150mm的色譜柱可采用流速2mL/min。
樣品與流動相
為了避免堵塞色譜柱的堵塞，所有樣品和溶劑，包括緩沖溶液在內(nèi)，都必須在使用前用0.45mm或0.2mm的濾膜過濾。樣品的水溶液不宜直接進(jìn)樣，而應(yīng)該保證有機(jī)溶劑至少50%的比例。
HILIC柱的固定相是親水的，而且在一定pH值范圍內(nèi)是帶電荷的。和大多數(shù)其他液相色譜技術(shù)不同的是HILIC的部分流動相是作為固定相的一部分來起作用的，因此關(guān)鍵是要在流動相中保持一定量的水。比例保持在3-60%的水平。
提高流動相中有機(jī)溶劑的比例，會提高溶質(zhì)的保留。典型的HILIC流動相是由水和揮發(fā)性緩沖鹽溶液以及40-97%的乙腈組成的，這決定了HILIC和適合與質(zhì)譜檢測器(MS)或蒸發(fā)光散射檢測器(ELSD)聯(lián)用。其他幾種與水能混溶的極性有機(jī)溶劑也可以用于HILIC的分析。這些溶劑的洗脫強(qiáng)度與RPLC分析中的洗脫強(qiáng)度順序大體相反。乙腈是溶劑。
小心避免使用在高有機(jī)溶劑溶解度不好的磷酸鹽或其他緩沖鹽，以免產(chǎn)生沉淀損壞色譜柱。避免三氟乙酸和其他離子對試劑。
色譜柱的保養(yǎng)
pH 避免在pH低于2或高于8的條件下使用Polar-Propylamide柱。較高的pH會溶解硅膠，從而使部分或全部的Propylamide鏈從硅膠表面脫落，引起分離效率的降低和保留時間的改變。為了獲得的分離效果和延長柱的使用壽命，請盡量使用pH在2-8范圍內(nèi)的流動相。
壓力 盡管Polar-Propylamide柱可在高至5000psi的壓力下使用，但正常的操作壓力應(yīng)當(dāng)?shù)陀?000psi。長時間在高壓下運(yùn)行會損壞色譜柱和輸液泵。由于壓力來源于流速，因此zui大流速將受制于系統(tǒng)所能承受的壓力。一般而言，柱壓會隨著色譜柱使用時間的增加而逐漸增加。壓力突然增加預(yù)示色譜柱入口端的篩板發(fā)生了堵塞。在這種情況下，建議將色譜柱反接后用適宜的溶劑進(jìn)行沖洗。
溫度 zui高操作溫度為60°C。長時間在高溫(>75°C)下操作也會損壞色譜柱，這種情形在高的pH(>8.5)條件下特別突出。
儲藏 HILIC柱建議保存在有機(jī)溶劑和水或低濃度緩沖液的混合溶液中, 如：90/10(v)乙腈/10mM乙酸銨溶液，pH6.8。每根色譜柱在運(yùn)輸過程中均會附有兩個可拆卸的堵頭。為了防止柱床干涸，請用堵頭塞緊色譜柱的兩端。

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