特別提示:包括Taq Plus DNA聚合酶在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱:Taq Plus DNA聚合酶
英文名稱:Taq Plus DNA Polymerase
產(chǎn)品貨號:JN0018
產(chǎn)品規(guī)格:250U
本酶是Taq DNA聚合酶和Pfu DNA聚合酶按特定比例混合而成。Taq Plus DNA聚合酶具有Taq DNA聚合酶很強的DNA聚合能力,同時由于Pfu DNA的存在,具有一定的保真特性, 能部分糾正 DNA擴增過程中所出現(xiàn)的錯誤。與Taq DNA聚合酶相比,具有擴增長度 增加(簡單模板可有效擴增20kb,復(fù)雜模板可有效擴增10kb), 保真度好的特點;與Pfu DNA聚合酶相比,具有擴增能力強,反應(yīng)效率高的優(yōu) 勢。使用本制品擴增得到的PCR產(chǎn)物具有3′端"A"突出,因此可直接克隆于T載體中。
產(chǎn)品組成:
組份
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JN0018-250U
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Taq Plus DNA(5U/μl)
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50μl
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dNTP混合液(各10mM)
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200μl
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5×Taq Plus Buffer with Mg2+
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1ml
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產(chǎn)品用途:
1、可替代大部分Taq DNA聚合酶的用途;
2、需高靈敏度的PCR擴增;
3、大片段PCR擴增反應(yīng) (可達 20kb)。
使用建議:使用本制品擴增得到的PCR產(chǎn)物具有3′端"A"突出,可直接克隆于T載體中。
應(yīng)用實例:

圖例一)使用Taq Plus配制的50μl擴增體系中,以5ng λDNA為模板,對1kb~20kb片段的擴增結(jié)果。
泳道M:λ/HindIII;泳道1:1kb; 泳道2:2kb; 泳道3:4kb; 泳道4:6kb; 泳道5:8kb; 泳道6:10kb 泳道7:12kb 泳道8:20kb

圖例二)50μl擴增體系中,分別以100ng~0.1ng小鼠基因組DNA為模板,可很好地擴增出1.1kb DNA片段(IL-1b 基因)。
泳道M:DNA Ladder 2000 泳道1:100ng; 泳道2:10ng; 泳道3:1ng; 泳道4:0.1ng
常用反應(yīng)體系(50μl)
組分
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體積
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5× Taq Plus Buffer
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5μl
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上游引物
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0.2-1.0μM(終濃度)
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下游引物
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0.2-1.0μM(終濃度)
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dNTP(各10mM)
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1.0μl
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模板
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1-50ng(質(zhì)粒)
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10ng-1μg(基因組)
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Taq Plus
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0.25μl(1.25U)
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ddH2O
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至50μl
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*Mg2+終濃度為2mM
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質(zhì)量保證:經(jīng)多次柱純化,SDS-PAGE檢測純度大于95%;PCR方法檢測無大腸桿菌DNA殘留、無核酸內(nèi)、外切酶污染。
活性定義:在74℃條件下,30分鐘內(nèi)催化10nmol dNTP的摻入反應(yīng)成為酸不溶性物質(zhì)所需的酶量為一個單位。
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名稱:DMSO,PCR級
貨號:BTN80205
規(guī)格:1.5mL
大量實驗顯示5-10%的DMSO能夠促進PCR反應(yīng),尤其是高GC模板的PCR反應(yīng),本產(chǎn)品就是專門用于PCR或RT-PCR的高純度DMSO。
儲存條件:常溫運輸及保存,有效期一年。
名稱:硫酸鎂溶液(PCR級MgSO4溶液)
貨號:BTN130840
規(guī)格:5mL
本產(chǎn)品為專門用于PCR的MgSO4溶液,濃度10mM,可以用于調(diào)節(jié)MgSO4的zuì佳濃度。MgSO4為常用的PCR增強劑之一。
儲存條件:低溫運輸、-20℃保存,有效期一年。
名稱:25mM氯化錳溶液(PCR級MnCl2溶液)
貨號:BTN130307
規(guī)格:5mL
本產(chǎn)品為專門用于易錯PCR的MnCl2水溶液,濃度為25mM,可用于調(diào)節(jié)MnCl2的zuì佳濃度。由于Mg2+在PCR過程中可以穩(wěn)定非互補的堿基對,Mn2+能夠降低聚合酶對模板的特異性,因而調(diào)整兩種離子的濃度,可獲得不同突變頻率的多樣性文庫。
氯化錳分子量為125.8,CAS號為7773-01-5,水合氯化錳外觀為玫瑰色單斜晶體;無水氯化錳外觀為桃紅色結(jié)晶。密度為2.977g/cm3。熔點是650℃。在高于熔點溫度下升華。沸點1190℃。易溶于水,溶于醇,不溶于醚。
儲存條件:低溫運輸、-20℃保存,有效期一年。
名稱:10nt隨機引物(0.5μg/uL)
貨號:BTN131227
規(guī)格:250
本產(chǎn)品為長度為10nt的隨機引物,序列為5′-(NNNNNNNNNN)-3′,主要用于cDNA的合成和DNA探針標計。
儲存條件:低溫運輸和-20℃保存,有效期一年。
疑難解答:
Q: 隨機引物的長度對cDNA合成有何影響?
A: 文獻報道,長度為10個nt的隨機引物合成cDNA的效果好于6nt長的隨機引物。
名稱:即用型熒光定量RT-PCR試劑盒
貨號:BTN101219
規(guī)格:50次
本產(chǎn)品是基于熒光染料檢測的即用型雙酶一管式RT-PCR試劑盒,可以對靶片段進行實時定量RT-PCR分析(quantitative RT-PCR、qRT-PCR)。產(chǎn)品含有經(jīng)過優(yōu)化的緩沖液組分、MMLV-Taq DNA聚合酶混合物、dNTPs、MgCl2及熒光染料DNAgreen等所有一管式實時定量RT-PCR所需要的成分,用戶只需加入RNA模板和引物即可進行實時定量RT-PCR反應(yīng),具有廣泛的用途。
產(chǎn)品特點:
1.一管式完成qRT-PCR反應(yīng),避免樣品交叉污染,尤其適合臨床應(yīng)用。
2. 即開即用,用戶不需要單獨準備qRT-PCR所需的各種試劑。
3. 主要成分只有兩個(RT-PCR buffer和MMLV-Taq Mix),將加樣步驟減少到zuì低,大降低了加樣誤差,增加了可重復(fù)性。
4. 使用范圍廣,適用于從病毒RNA到人RNA的各種RNA模板。
5.高靈敏度,每個RT-PCR體系zuì低可以檢測200拷貝的RNA分子,可擴增的模版RNA的zuì長達2000nt。
試劑盒組成:
成分
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規(guī)格
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雙酶一管式qRT-PCR Buffer,2×
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750μl
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MMLV-Taq Mix
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100μl
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RNase-free水
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1ml
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說明書
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1份
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儲存條件:低溫運輸,-20℃保存,保存期限為一年。
使用方法:
1.在一干凈的無RNase的PCR管中,先加入下列成分(下面只列出樣品管的設(shè)置情況,用戶可自己根據(jù)需要設(shè)置陽性和陰性對照):
成分
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樣品
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自備RNA模板(分下面三種情況)
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見下
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總RNA
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100-500ng
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或poly(A)mRNA
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10-500ng
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或體外轉(zhuǎn)錄得到的專一RNA
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0.01pg-500ng
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RNA特異性引物一(自備)
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終濃度300nM(注1)
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RNA特異性引物二(自備)
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終濃度300nM
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RNase-free水
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補到10μL
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雙酶一管式qRT-PCR Buffer(2×)
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15μl
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自備ROX(某些熒光PCR機型需要)
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3μL(注2)
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MMLV-Taq Mix
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2μl
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注1:通常初次使用本試劑時,可用引物濃度300nM進行實驗,根據(jù)實驗結(jié)果具體情況,在200~800nM范圍內(nèi)調(diào)整引物濃度。引物、待檢樣品的具體加量用戶可以根據(jù)實際情況調(diào)整,同時增減RNase-free水用量,保證總反應(yīng)體積不變即可。
注2:如果使用ABI公司的7500,7700和7900三種型號的熒光PCR儀器,則需用自備的ROX進行Ct值校正。對ABI 7700和7900,ROX的zuì佳濃度為1×(即在每30μl反應(yīng)體系中加3μl 10×ROX)。對ABI 7500,ROX的zuì佳濃度為0.05-0.1×(每30μL反應(yīng)體系加0.3μL 10×ROX;也可將10×ROX稀釋到1×,然后每個反應(yīng)體系加入3μL 1×ROX)。ROX會在溶解曲線中產(chǎn)生噪音,因此,如果出現(xiàn)了雜峰,將軟件中“Passive Reference Dye”中的“ROX”選項取消打勾,然后重新分析數(shù)據(jù)。對于iCycler IQ,MJ Opticon,MJ Chromo4,MX3000,MX4000,RotorGene3000,RotorGene 6000和LightCycler 480等型號的熒光PCR儀器,ROX不是必須的,但加入的話也不會影響整個PCR分析。
2. 輕柔混合均勻后放入PCR儀中進行熒光定量RT-PCR。
3. 設(shè)定RT-PCR反應(yīng)條件時,一般將RT的條件設(shè)定成42℃ 30分鐘,后接94℃變性5分鐘,然后進入PCR循環(huán)(PCR參數(shù)將根據(jù)自備引物的Tm值和PCR產(chǎn)物長度由用戶自行決定注)、zuì后72℃ 5分鐘。并在退火或延長步驟中記錄熒光信號。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在沒結(jié)合DNA時,zuì大吸收光譜在471nm,結(jié)合DNA時的zuì大吸收光譜在500nm,zuì大發(fā)射光譜在530nm。
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