細胞膜橙色熒光染料 Dil

 

Cat number：KFS151

Store at -20℃ for 12 months，避光

For Research Use only

 

一、 產(chǎn)品描述

 

長鏈二烷基羰花青化合物，特別是 Dil（MW：933.88），廣泛應(yīng)用于固定和非固定的組織與細胞中，進行順行或逆行的神經(jīng)示蹤分析。

Dil 不會影響細胞的活力、生長以及基本生理特性。Dil 標(biāo)記運動神經(jīng)元，可在培養(yǎng)基條件下持續(xù)跟蹤長達四周，在體內(nèi)長達一年。染料通過在質(zhì)膜中的緩慢橫向擴散均勻標(biāo)記神經(jīng)元，0.2~0.6mm/每天/固定標(biāo)本，在活體組織里，可以達到 6mm/每天。經(jīng)過醛固定的組織，Dil 的擴增可以持續(xù)長達 1~2 年。一般情況下未標(biāo)記的染料不會向非標(biāo)記的細胞轉(zhuǎn)移，除非質(zhì)膜被破壞，比如切片部位。

光譜特性

 

 

 

 

 

 

 

 

iO, DiI, DiD, and DiR 結(jié)合磷脂雙分子層的標(biāo)準(zhǔn)發(fā)射光譜圖。

 

二、產(chǎn)品包裝

 

組份	KFS151	儲存條件
細胞膜橙色熒光染料 Dil	10mg	-20℃，避光

 

三、操作說明

 

制備儲液

固體染料以 DMF 或者 DMSO 或乙醇溶解配制為 1mM 的儲液。一旦制成的儲液，需避光冷凍，儲液形式可保存 6 個月。

 

標(biāo)記懸浮細胞

1.1 以無血清培養(yǎng)基懸浮細胞密度為 1X10⁶ 個/mL。

1.2 每 1mL 細胞懸液加入 5μL 細胞標(biāo)記液，混勻。

1.3 37 度孵育 1~20 分鐘。不同的細胞類型所用的孵育條件不一樣，可參考表格 1.初始孵育時間可選擇 20

分鐘，隨后再進行優(yōu)化。

1.4 37 度，1500rpm 5 分鐘離心標(biāo)記懸浮液。

1.5 去上清，用 37 度的培養(yǎng)基輕輕懸浮細胞。

1.6 重復(fù)兩次以上的洗滌步驟。

1.7 放置 10 分鐘后進行熒光測量。

 

標(biāo)記貼壁細胞

 

2.1 培養(yǎng)細胞至所需的匯合度。

2.2 取出爬片，吸去培養(yǎng)基，放到蓋玻片濕盒中。

2.3 準(zhǔn)備標(biāo)記，每 1mL 新鮮培養(yǎng)基中加入 5μL 的標(biāo)記液。

2.4 吸取 100μL 蓋玻片周圍的染色介質(zhì)，輕輕鋪勻，使之蓋滿整個爬片。

2.5 37 度孵育細胞，不同的細胞類型所用的孵育條件不一樣，可參考表格 1.初始孵育時間可選擇 20 分鐘，

隨后再進行優(yōu)化。

2.6 去掉染色介質(zhì)，用新鮮預(yù)熱的培養(yǎng)基孵育 10 分鐘，再更換以新的預(yù)熱的培養(yǎng)基孵育 10 分鐘，重復(fù)洗

滌蓋玻片三次。

 

Cell Line	Optimal  incubation  time
Jurkat	2 minutes
HeLa	8 minutes
P3X	15 minutes
3T3	15 minutes

表1.優(yōu)化的細胞染色孵育時間

 

 

Tracer	Ex	Em	Optical Filters
	(nm)	(nm)	Omega	Chroma
DiO	484	501	XF23	31001
DiI	549	565	XF32	31002
DiD	644	665	XF47	31023
DiR	750	780	XF112	41009

DiO, DiI, DiD and DiR 光譜特性