WE0202 植物RNA提取試劑盒

北京百奧萊博供應(yīng)的植物RNA提取試劑盒用于科研目的,我公司的植物RNA提取試劑盒品質(zhì)上佳,經(jīng)過多年的開發(fā)生產(chǎn),已然非常成熟,歡迎廣大新老客戶訂購。...
特別提示:包括植物RNA提取試劑盒(含DNase I)在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱:植物RNA提取試劑盒(含DNase I)
英文名稱:RNAnt RNA Extraction Kit(DNase I)
產(chǎn)品貨號(hào):WE0202
產(chǎn)品規(guī)格:50次
本試劑盒適用于從多種植物中提取RNA,即便是從多糖多酚含量豐富的植物中也能成功提取高質(zhì)量的RNA,如水稻葉片、小麥葉片、玉米葉片、煙草葉、松針、銀杏葉、楊樹葉、石榴葉、冬青葉、蘋果、桃、梨、西紅柿、櫻桃、杏、香蕉、葡萄、枇杷、桂圓果皮、桂圓果肉、荔枝果皮、荔枝果肉、大豆、花生、玉米、馬鈴薯塊莖、月季花瓣、石榴花瓣,香菇、平菇等樣本。獨(dú)特的裂解液配方,可使細(xì)胞中的RNA酶迅速滅活,有效去除多糖多酚對(duì)RNA提取的影響,無需苯酚、氯fǎng等試劑,同時(shí)采用硅基質(zhì)膜吸附RNA進(jìn)行純化,提取的總RNA純度高,無基因組、蛋白質(zhì)和其它雜質(zhì)的污染,可用于Real Time RT-PCR、RT-PCR 、Northern Blot、Dot Blot、和體外翻譯等多種下游實(shí)驗(yàn)。
試劑盒組成:
組份 | 50次 |
DNase I | 1000 U |
10×Reaction Buffer | 1000μl |
Buffer RLS | 40ml |
Buffer RW1 | 40ml |
Buffer RW2(濃縮液) | 11ml |
RNase-Free Water | 10ml |
過濾柱FS及收集管 | 50套 |
吸附柱RM及收集管 | 50套 |
RNase-Free離心管(1.5ml) | 50個(gè) |
保存條件:DNase I及10×Reaction Buffer -20℃保存,其它組分室溫(15~30℃)。
自備試劑:β-巰基乙醇、無水乙醇(新開封或提取RNA專用)
產(chǎn)品特點(diǎn):
1、適用范圍廣:可從各種植物中提取總RNA,即便是多糖多酚含量豐富的植物也能成功提取。
2、純度高:徹底去除污染物及下游反應(yīng)抑制物,提取的RNA適合于多種下游應(yīng)用。
3、成功提取的樣本:水稻葉片、小麥葉片、蘋果、桃、梨、西紅柿、櫻桃、杏、香蕉、葡萄、桂圓果皮、桂圓果肉、荔枝果皮、荔枝果肉、黃豆、花生、馬鈴薯塊莖、松針、銀杏葉、楊樹葉、冬青葉、月季等樣本。
RNA得率:
植物樣本(100mg) | 總RNA量(μg) |
擬南芥莢果 | ~50 |
大豆 | ~55 |
玉米葉片 | ~55 |
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備及重要注意事項(xiàng):
1、預(yù)防RNase污染,應(yīng)注意以下幾方面:
① 使用無RNase的塑料制品和槍頭。
② 操作人員戴一次性口罩和手套,實(shí)驗(yàn)過程中要勤換手套。
2、提取的樣品避免反復(fù)凍融,否則影響RNA提取得率和質(zhì)量。
3、Buffer RLS如果產(chǎn)生沉淀,請(qǐng)加熱使其溶解后室溫放置。
4、Buffer RLS在使用前請(qǐng)加入β-巰基乙醇,1ml Buffer RLS加20μl β-巰基乙醇。加入β-巰基乙醇的Buffer RLS室溫可保存1個(gè)月。
5、次使用Buffer RW2前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說明加入無水乙醇。
操作步驟:
1、勻漿處理:取50-100mg植物組織在液氮中迅速研磨成粉末,加入500μl Buffer RLS(使用前請(qǐng)先檢查是否加入β-巰基乙醇),立即渦旋劇烈震蕩混勻。
注意:對(duì)于含水量其豐富的材料,如西瓜果肉,西紅柿,梨果肉等,可以適當(dāng)多加入些材料,zuì多可增加至200mg;對(duì)于富含淀粉的樣本或成熟葉片,可適當(dāng)增加Buffer RLS的用量,zuì多可增加至700μl。
2、4℃ 12000rpm(~~13400×g)離心2分鐘。
3、將上清液轉(zhuǎn)入已裝入收集管的過濾柱中,4℃ 12000rpm離心1分鐘,小心吸取收集管中的上清并轉(zhuǎn)移至新的RNase-Free 離心管(自備)中,槍頭盡量避免接觸收集管中的細(xì)胞碎片沉淀。
4、緩慢加入0.5倍上清體積的無水乙醇,混勻(此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)沉淀),將得到的溶液和沉淀一起轉(zhuǎn)入已裝入收集管的吸附柱中,若一次不能將全部溶液加入吸附柱中,請(qǐng)分兩次轉(zhuǎn)入。4℃ 12000rpm離心1分鐘,棄廢液,將吸附柱重新放回收集管中。
5、向吸附柱RM中加入350μl Buffer RW1,4℃ 12000rpm離心1分鐘,棄廢液,將吸附柱重新放回收集管中。
6、配制DNase I 混合液:取52μl RNase-Free Water,向其中加入8μl 10×Reaction Buffer和20μl DNase I(1 U/μl),混勻, 配制成終體積為80μl的反應(yīng)液。
7、向吸附柱中直接加入80μl DNase I 混合液,20-30℃孵育15分鐘。
8、向吸附柱RM中加入350μl Buffer RW1,4℃ 12000rpm離心1分鐘,棄廢液,將吸附柱重新放回收集管中。
9、向吸附柱RM中加入500μl Buffer RW2(使用前檢查是否加入無水乙醇), 4℃ 12000rpm離心1 分鐘,棄廢液,將吸附柱重新放回收集管中。
10、重復(fù)步驟9。
11、4℃ 12000rpm離心2分鐘。
注意:這一步的目的是將吸附柱中殘余乙醇去除,乙醇?xì)埩魰?huì)影響后續(xù)的酶促反應(yīng)(酶切、PCR等)。
12、將吸附柱RM裝入新的RNase-Free Centrifuge Tubes(1.5ml)中,向吸附膜的中間部位懸空滴加30-50μl RNase-Free Water,室溫放置2分鐘,4℃ 12000rpm離心1分鐘,得到的RNA溶液保存在-70℃,防止降解。
注意:
① RNase-Free Water體積不應(yīng)小于30μl,體積過小影響回收率。
② 如果要提高RNA的產(chǎn)量,可用30-50μl新的RNase-Free Water重復(fù)步驟12。
③ 如果要提高RNA濃度,可將得到的溶液重新加入到吸附柱中,重復(fù)步驟12。
儲(chǔ)存條件:2~8℃。
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