CD3/CD28抗體偶聯(lián)磁珠由專業(yè)試劑供應(yīng)商北京百奧萊博提供，僅用于生物化學(xué)研究方面，我公司專注于磁珠微球產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和供應(yīng)，為您提供的CD3/CD28抗體偶聯(lián)磁珠質(zhì)量可靠，批間差小，且價格公道，熱切盼望您選購我們的產(chǎn)品。...

特別提示：包括CD3/CD28抗體偶聯(lián)磁珠在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：CD3/CD28抗體偶聯(lián)磁珠
產(chǎn)品貨號：MQ0090
產(chǎn)品規(guī)格：1ml

AMMS:Trademark:CD3/CD28抗體偶聯(lián)磁珠是一種超順反磁珠，磁珠大小與細(xì)胞大小基本一致，其表面結(jié)合CD3,CD28單克隆抗體的復(fù)合物，這些單抗可以對人T細(xì)胞表面分子進(jìn)行活化。用于人T細(xì)胞的體外分離、激活與擴(kuò)增。通過在磁珠上同時偶聯(lián)抗CD3和抗CD28抗體，該磁珠可提供T細(xì)胞激活與擴(kuò)增所需的主要和協(xié)同刺激信號。
應(yīng)用：
? 體外細(xì)胞培養(yǎng)
產(chǎn)品特性：
? GMP級生產(chǎn)環(huán)境，行業(yè)zuì高標(biāo)準(zhǔn)
? 基因工程人源化改造
? CHO穩(wěn)定細(xì)胞株表達(dá)，無血清培養(yǎng)基生產(chǎn)
? GE Wave生物反應(yīng)器培養(yǎng)

根據(jù)您的關(guān)注的CD3/CD28抗體偶聯(lián)磁珠，您可能還對以下產(chǎn)品有需求：



名稱：鎳離子螯和His-tag蛋白純化磁珠
貨號：CZ005
規(guī)格：5ml/2×50ml/4×250ml
產(chǎn)品簡介：
組氨酸標(biāo)簽蛋白純化磁珠具有超順磁性，專為、快速純化組氨酸標(biāo)簽蛋白而設(shè)計的一種功能化材料?？赏ㄟ^磁性分離方式直接從生物樣品中一步純化出高純度的目標(biāo)蛋白，大地簡化純化工藝和提高純化效率，適合科研和工業(yè)領(lǐng)域便捷地進(jìn)行組氨酸標(biāo)簽蛋白純化。
與傳統(tǒng)層析方式使用的金屬螯合瓊脂糖預(yù)裝柱相比，采用磁珠純化組氨酸標(biāo)簽蛋白，無需對樣品進(jìn)行多次長時間的高速離心和濾膜過濾、無需控制流速、更無需高昂的層析設(shè)備。樣品與磁珠的特異性結(jié)合、洗滌以及目標(biāo)蛋白的洗脫變得簡單、快速、易操作。對于熟練的操作者而言，在1 h內(nèi)就能獲得高純度的目標(biāo)蛋白，且能輕松實現(xiàn)高通量和大規(guī)模樣品的平行處理，為研究者節(jié)省了時間和成本。
本產(chǎn)品系列包括鎳離子(Nickel)、鈷離子(Cobalt)兩種金屬離子螯合磁珠，它們在目標(biāo)蛋白結(jié)合量和非特異性吸附等性能上有所區(qū)別，用戶可根據(jù)目標(biāo)蛋白與不同種類金屬的結(jié)合性能，以及對目標(biāo)蛋白的產(chǎn)量和純度的要求，選擇不同種類的金屬離子螯合磁珠。具體產(chǎn)品信息及規(guī)格參考《產(chǎn)品特性》。
保質(zhì)期 在2～8℃可穩(wěn)定保存，保質(zhì)期2年
注1：磁珠蛋白結(jié)合量與目標(biāo)蛋白特性有關(guān)，此處僅做參考值
注2：1 mL 磁珠懸液中包含100 μL磁珠
注3：磁珠溶劑耐受性請參考附錄信息
適用范圍：
適用于純化細(xì)菌、酵母、昆蟲和哺乳動物細(xì)胞等分泌或胞內(nèi)表達(dá)的可溶性組氨酸標(biāo)簽蛋白，也可用于變性蛋白的純化(包涵體需變性后再進(jìn)行純化)。
操作流程：
1. 緩沖液的準(zhǔn)備
目標(biāo)蛋白與組氨酸標(biāo)簽蛋白純化磁珠的結(jié)合性能將直接影響目標(biāo)蛋白的純化效率，而各種緩沖液配制也將在一定程度上影響目標(biāo)蛋白的回收率和純度。因此，在較大規(guī)模蛋白純化之前，用戶應(yīng)該自行設(shè)計實驗，篩選出適合純化目標(biāo)蛋白的緩沖液體系，主要包括Binding Buffer、Washing Buffer、Elution Buffer。
增加咪唑濃度進(jìn)行洗脫是組氨酸標(biāo)簽純化磁珠zuì常用的洗脫方法，次使用時，在不確定zuì佳的洗脫咪唑濃度情況下，推薦在緩沖液中分別加入10 mM、20 mM、50 mM、100 mM、200 mM、300 mM、400 mM、500 mM咪唑，濃度從低到高分別洗脫，磁吸后收集蛋白上清液，之后通過SDS-PAGE電泳等方法鑒定洗脫結(jié)果。
以下提供的緩沖液體系適用于多數(shù)組氨酸標(biāo)簽蛋白的純化，供用戶參考。
Binding Buffer：20 mM Phosphate Buffer，500 mM NaCl，5～50 mM Imidazole，pH7.4
Washing Buffer：20 mM Phosphate Buffer，500 mM NaCl，50～100 mM Imidazole，pH7.4
Elution Buffer：20 mM Phosphate Buffer，500 mM NaCl，500 mM Imidazole，pH7.4
2. 樣品處理
本說明書提供以下三種樣品的處理方法：
(1)大腸桿菌、酵母等細(xì)胞內(nèi)表達(dá)蛋白：表達(dá)細(xì)胞用適量的Binding Buffer稀釋，加入蛋白酶抑制劑(如終濃度為1 mM的PMSF)，重懸細(xì)胞，冰浴超聲裂解細(xì)胞，即為粗蛋白樣品。如果樣品過于粘稠，可根據(jù)需要在粗樣品中加入適量核酸酶，冰浴30 min，以降解核酸。另外，用戶也可以根據(jù)實際需要對蛋白樣品進(jìn)行離心操作。
(2)胞外表達(dá)蛋白：取胞外表達(dá)上清，用等量Binding Buffer稀釋，即為粗蛋白樣品。
(3)動物細(xì)胞胞內(nèi)表達(dá)蛋白：取適量動物細(xì)胞，先用適量PBS洗滌1次，棄上清；接著用適量含1%(v/v)Triton X-100或1%(v/v)NP-40的Binding Buffer重懸，加入蛋白酶抑制劑(如終濃度為1 mM的PMSF)，冰浴10 min，即為粗蛋白樣品。
3. 磁珠預(yù)處理
一般情況下，磁珠的使用量是由用戶根據(jù)目標(biāo)蛋白產(chǎn)量和磁珠載量信息計算獲得。例如：采用大腸桿菌表達(dá)某目標(biāo)蛋白，500 mL發(fā)酵液收獲2 g濕重的菌體，通過預(yù)實驗估算其目標(biāo)蛋白產(chǎn)量為10～20 mg，用戶需要取5 mL磁珠懸液用于目標(biāo)蛋白的純化。以下即以此為例進(jìn)行詳細(xì)說明：
(1)將磁珠產(chǎn)品置于漩渦混勻器上充分混勻，用移液器取5 mL磁珠懸液于15 mL離心管中，進(jìn)行磁性分離*，棄上清液，從磁性分離器上取下離心管。
(2)加入5 mL Binding Buffer到上述裝有磁珠的離心管中，上下翻轉(zhuǎn)離心管數(shù)次，使磁珠重新懸??；進(jìn)行磁性分離，移去上清液。重復(fù)洗滌2次。
(注*：在磁性分離過程中，為了減少磁珠在使用過程中的損耗，待溶液變澄清后，蓋緊離心管蓋子，保持離心管仍在磁性分離器上，手持磁性分離器與離心管上下翻轉(zhuǎn)數(shù)次，使澄清的溶液涮洗離心管蓋上殘留的磁珠，靜置片刻，使溶液重新變澄清；以下同。)
4. 目標(biāo)蛋白與磁珠結(jié)合
(1)用10 mL Binding Buffer懸浮2 g濕重的菌體，進(jìn)行破碎和裂解之后，即為目標(biāo)粗蛋白樣品，加入到裝有預(yù)處理磁珠的離心管中，將離心管置于漩渦混勻器振蕩15 s。
(2)將離心管置于旋轉(zhuǎn)混合儀上，室溫旋轉(zhuǎn)混合20～30 min(如果需要，可以在2～8℃ 的低溫環(huán)境下，旋轉(zhuǎn)混1 h，防止目標(biāo)蛋白降解)。
(3)將離心管置于磁性分離器上進(jìn)行磁性分離，移出上清液至新的離心管中以備后續(xù)檢測，從磁性分離器上取下離心管進(jìn)行后續(xù)洗滌步驟。
5. 磁珠洗滌
(1)加入10 mL Washing Buffer到裝有磁珠的離心管中，輕輕翻轉(zhuǎn)離心管數(shù)次，使磁珠重新懸浮，磁性分離，移出清洗液到新的離心管中，以備取樣檢測。重復(fù)此步驟1次。
(2)加入10 mL Washing Buffer到裝有磁珠的離心管，使磁珠重新懸浮，將磁珠懸液轉(zhuǎn)移到新的離心管(避免原離心管壁上非特異性吸附蛋白污染目標(biāo)蛋白)，磁性分離，移出上清液到清洗液收集管。
6. 目標(biāo)蛋白洗脫
(1)用戶可根據(jù)需要改變洗脫體積調(diào)整目標(biāo)蛋白濃度，加入2～10 mL Elution Buffer，輕輕翻轉(zhuǎn)離心管數(shù)次，使磁珠懸浮，磁性分離，收集洗脫液到新的離心管中，即為純化的目標(biāo)蛋白樣品。
(2)如果需要，可以重復(fù)上述步驟1次，收集樣品到新的離心管中，以檢測目標(biāo)蛋白是否洗脫完全。
7. 磁珠后處理
(1)在裝有磁珠的離心管中加入5 mL Elution Buffer，上下翻轉(zhuǎn)離心管數(shù)次，使磁珠懸浮，磁性分離，去除上清液。
(2)重復(fù)上述步驟2次。
(3)在離心管中加入5 mL ddH2O，上下翻轉(zhuǎn)離心管數(shù)次，使磁珠懸浮，磁性分離，去除上清液。
(4)重復(fù)上述步驟2次。
(5)加入Storage Buffer到磁珠中使總體積為5 mL，保存于2～30℃(長期保存，置于2～8℃)，可用于下一次同種蛋白的純化。
8. 磁珠再生
磁珠連續(xù)使用三次以上，其結(jié)合目標(biāo)蛋白的能力可能會明顯降低，建議進(jìn)行磁珠再生處理。
Stripping Buffer：20 mM Sodium Phosphate，500 mM NaCl，100 mM EDTA，pH 7.4
Beads Washing Buffer(可選)：0.5 M NaOH，2 M NaCl
Recharge Buffer：100 mM NiSO4/CoCl2(該化學(xué)試劑有一定的毒性，可能造成過敏反應(yīng)，使用時務(wù)必注意)
Storage Buffer：20%(v/v)乙醇
以5 mL 10%(v/v)磁珠懸液為例，詳細(xì)說明磁珠再生操作：
(1)將磁珠懸液進(jìn)行磁性分離，去除上清液，從磁性分離器上取下離心管，在離心管中加入5 mL ddH2O，上下翻轉(zhuǎn)離心管數(shù)次，使磁珠重新懸浮，磁性分離，去除上清液。
(2)加入5 mL Stripping Buffer，上下翻轉(zhuǎn)離心管數(shù)次，使磁珠重新懸浮，室溫旋轉(zhuǎn)混合5 min，磁性分離，去除上清液。重復(fù)此步驟1次。
(3)加入5 mL ddH2O，上下翻轉(zhuǎn)離心管數(shù)次，使磁珠重新懸浮，磁性分離，去除上清液，重復(fù)此步驟2次。
(4)堿處理：加入5 mL Beads Washing Buffer，上下翻轉(zhuǎn)離心管數(shù)次，使磁珠重新懸浮，室溫旋轉(zhuǎn)混合5 min，磁性分離，去除上清液。加入5 mL ddH2O，上下翻轉(zhuǎn)離心管數(shù)次，使磁珠重新懸浮，磁性分離，去除上清液。重復(fù) ddH2O洗滌步驟3～5次，至洗滌液呈中性為止。
(5)加入5 mL Recharge Buffer，上下翻轉(zhuǎn)離心管數(shù)次，使磁珠重新懸浮，室溫旋轉(zhuǎn)混合20 min，磁性分離，去除上清液。
(6)加入5 mL ddH2O，上下翻轉(zhuǎn)離心管數(shù)次，使磁珠重新懸浮，磁性分離，去除上清液。重復(fù)此步驟4次以上，保證鎳離子去除完全。
(7)加入Storage Buffer到磁珠中使總體積為5 mL，保存于2～30℃(長期保存，置于2～8℃)。
蛋白純化流程的優(yōu)化：
以上操作流程適用于大部分組氨酸標(biāo)簽蛋白的純化，根據(jù)目標(biāo)蛋白與金屬離子螯合磁珠的結(jié)合性能不同，用戶可以從以下幾個方面對純化流程進(jìn)行優(yōu)化，以提高目標(biāo)蛋白的回收率和純度。
提高目標(biāo)蛋白回收率的參考方法：
(1)降低樣品溶液和Binding Buffer中的Imidazole濃度；
(2)樣品溶液和其它緩沖液中添加表面活性劑等物質(zhì)；
(3)添加合適的蛋白酶抑制劑，防止目標(biāo)蛋白降解；
(4)增加磁珠用量；
(5)延長蛋白與磁珠孵育的時間；
(6)延長洗脫目標(biāo)蛋白的時間或增加洗脫次數(shù)。
提高目標(biāo)蛋白純度的參考方法：
(1)提高樣品溶液和Binding Buffer中Imidazole、NaCl的濃度；
(2)樣品和緩沖液中添加表面活性劑等物質(zhì)；
(3)添加合適的蛋白酶抑制劑，防止目標(biāo)蛋白降解；
(4)延長洗滌的時間，增加洗滌次數(shù)；
(5)采用梯度Imidazole濃度洗脫目標(biāo)蛋白。
注意事項：
1. 次使用本產(chǎn)品前，請務(wù)必詳細(xì)閱讀本說明書；
2. 磁珠使用和保存過程中應(yīng)避免冷凍、干燥和高速離心等操作；
3. 在使用本產(chǎn)品前，請務(wù)必充分振蕩使磁珠保持均勻的懸浮狀態(tài)；
4. 請選用質(zhì)量好的移液器吸頭和離心管，以免磁珠貼壁或混合過程發(fā)生滲漏引起磁珠的損耗；
5. 磁珠與溶液混合過程中，如果溶液粘稠無法通過翻轉(zhuǎn)離心管重懸磁珠，可采用移液器反復(fù)吹吸或短時漩渦混合使磁珠充分重懸；
6. 用戶可根據(jù)實際需要保留經(jīng)磁性分離移去的上清液，進(jìn)行取樣檢測，以便分析純化過程和優(yōu)化蛋白純化流程；
7. 本產(chǎn)品可以重復(fù)使用，當(dāng)純化性能降低時，建議進(jìn)行再生處理；
8. 使用過的磁珠重復(fù)使用時，建議純化同種蛋白，純化不同種類的蛋白時，建議使用新的磁珠；
9. 本產(chǎn)品需與磁性分離器配套使用；
10. 本產(chǎn)品僅供研究使用。

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