RNA提取試劑的品牌是百奧萊博，是優(yōu)質(zhì)的RNA提取純化產(chǎn)品，本制品僅用于生物化學(xué)研究方面，我公司專注于RNA提取純化產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和供應(yīng)，為您提供的RNA提取試劑質(zhì)量可靠，批間差小，且價(jià)格公道，熱切盼望您選購(gòu)我們的產(chǎn)品。...

特別提示：包括RNA提取試劑在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：RNA提取試劑
英文名稱：RNA Extraction Reagent
產(chǎn)品貨號(hào)：RFT034
產(chǎn)品規(guī)格：100ml

本試劑是從細(xì)胞和組織中提取總RNA的即用型試劑，可以提取細(xì)菌、植物、動(dòng)物組織和細(xì)胞以及新鮮血液的總RNA。提取的總RNA可用于Northern blot、RT-PCR、Dot blot、RNase保護(hù)分析等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1 分相明顯：本試劑為粉紅色，便于lǜ仿分相后區(qū)分水相和有機(jī)相。
2 結(jié)果可靠：該試劑含有強(qiáng)烈抑制RNase活性的物質(zhì)，可靠保護(hù)RNA不降解。
3 價(jià)廉物美：其提取效果與國(guó)外進(jìn)口產(chǎn)品相媲美，價(jià)格卻低于它的三分之一。

自備試劑及耗材：
lǜ仿、異丙醇、75%乙醇(用RNase-free 水配制)、RNase-free的水、RNase-free的耗材(Tip頭，離心管等)。

操作步驟：

1、勻漿處理
組織中提取總RNA：
a.植物組織：植物葉片直接放入研缽中，加入少量液氮，迅速研磨成粉末，每50-100mg植物葉片加入1ml RNA 提取試劑。
b.動(dòng)物組織：按10-30mg組織加入1ml RNA 提取試劑，用電動(dòng)勻漿器或者一次性研磨杵充分勻漿。
培養(yǎng)細(xì)胞中提取總RNA：
a.貼壁細(xì)胞：無(wú)須胰酶消化，可直接用RNA 提取試劑進(jìn)行裂解，每10cm2培養(yǎng)面積加1mlRNA 提取試劑。
b.懸浮細(xì)胞：可直接離心收集、裂解，每1ml RNA 提取試劑可裂解5×106動(dòng)物或酵母細(xì)胞，或107細(xì)菌細(xì)胞。
血液中提取總RNA：
直接取新鮮的血液，加入3 倍體積紅細(xì)胞裂解液，混勻后室溫放置10分鐘，9,000 g離心1分鐘。徹底吸棄上清，收集白細(xì)胞沉淀。每100-200μl血液收集的白細(xì)胞沉淀加入1ml RNA提取試劑。

2、分層(Phase Separation)
根據(jù)樣品，選擇使用方法A或者方法B。如果不確定，則使用方法 B。
A、(細(xì)胞，血液，一般動(dòng)物組織)
室溫靜置5 分鐘，再按照1 ml RNA 提取試劑使用200μl的比例加入lǜ仿，用力顛倒離心管以混勻；室溫靜置3 -5 分鐘使之分層后，4℃ 12000g 離心15
分鐘。
B、(植物，脂肪及肝臟等某些雜質(zhì)含量較高的樣品)
室溫靜置5 分鐘后，4℃條件下12000 g 離心10 分鐘，將上清移入另外一個(gè)離心管中。再按照1 ml RNA提取試劑使用200μl 的比例加入lǜ仿，用力顛倒離心管以混勻。室溫靜置2 - 5 分鐘使之分層后，4℃條件下12000 g 離心15 分鐘。
注意：
·4℃ 離心對(duì)于降低基因組DNA 的污染是很重要的。
·雜質(zhì)含量高的樣品一定要使用2-B 操作。2-B 操作不僅可以將大部分雜質(zhì)離心去除，也可以將大片段的基因組
DNA 離心去除，方便加入lǜ仿后的分層，不過(guò)，如果想同時(shí)抽提總RNA 和基因組DNA，則使用2-A 操作。
·加入lǜ仿后的混勻是非常重要的，否則靜止分相易出現(xiàn)分相倒置，即水相在離心管下部而有機(jī)相在上部。不推薦振蕩混勻，而推薦直接用手混勻：將管底斜向朝上，手斜向快速搖動(dòng)，使體系成粉色乳狀。

3、RNA沉淀(RNA Precipitation)
小心將上層水相(通常可吸取550μl)移至另外一個(gè)離心管中，再加入等體積冰冷的異丙醇混勻，室溫放置10 - 20 分鐘，4℃12000g 離心10min，棄上清，RNA沉淀于管底。
注意：
·中間層和紅色下層置于 4℃ 保存，以便接下去抽提基因組DNA。
·用冰冷的異丙醇能更迅速的沉降RNA。
·取上層水相時(shí)要特別小心，不要吸入白色中間層及紅色下層。移取水相時(shí)要使用小體積移液器：200μl 移液器，Tip 的尖嘴要貼在管壁，慢慢松手吸出液體。
·對(duì)于脂肪類組織，包括腦組織，在上清的zuì上層為脂肪，取上清時(shí)不要吸入，必要時(shí)用等體積lǜ仿對(duì)上清再抽提一次。
·如果是雜質(zhì)含量高的樣品，強(qiáng)烈建議將此步操作改為：在上清中加入一半體積的異丙醇，混勻后，再加入一半 (指上清) 體積的RNA 沉淀試劑(1.2M NaCl，0.8M 檸檬酸鈉)。再混勻后，室溫放置10 – 20 分鐘。
·棄上清后，將離心管置于離心機(jī)中離心數(shù)秒，再用移液器將殘留液體小心吸出。這是zuì徹底的去除上清的方法，比倒掉上清后再將離心管倒扣在吸水紙上的方·法可靠得多。如果是雜質(zhì)含量高的樣品，強(qiáng)烈建議增加此步操作。如果肉眼看不見(jiàn)沉淀，則不要用移液器吸。

4、RNA漂洗(RNA Wash)
a.RNA 沉淀中加入1ml 75%乙醇(用RNase-free 水配制)，溫和振蕩離心管，懸浮沉淀。每1ml RNA提取試劑加入1ml 75％乙醇。
b.4℃ 7,500 g離心5min，棄上清。
注：轉(zhuǎn)速不要高于7,500g，否則得到的RNA不易溶解。
c.短暫快速離心，用移液器小心吸棄上清，注意不要吸棄沉淀。室溫放置1-2分鐘晾干沉淀。
注：RNA樣品不要過(guò)于干燥，否則很難溶解。

5、溶解RNA(Redissolving the RNA)
根據(jù)需要，沉淀中加入適量(一般可加50-100μl)RNase-free 水，輕彈管壁，以充分溶解RNA，-70℃保存。

儲(chǔ)存條件：2～8℃，避光，有效期12個(gè)月。

根據(jù)您的關(guān)注的RNA提取試劑，您可能還對(duì)以下產(chǎn)品有需求：



名稱：石蠟包埋組織RNA提取試劑盒
貨號(hào)：BTN81102
規(guī)格：30次
石蠟包埋組織本是珍貴的分子生物學(xué)研究材料，但是由于它們的保存時(shí)間一般都比較長(zhǎng)，很不容易從中提取到可以進(jìn)行PCR的RNA，存在的主要問(wèn)題是RNA的降解和脫蠟過(guò)程中樣品的丟失。本產(chǎn)品是專門(mén)用于從甲醛和非甲醛固定的石蠟包埋組織中快提RNA的試劑

試劑盒特點(diǎn)：
1.一管式操作，避免了可能的交叉污染和樣品RNA的丟失。
2.含一步離心式脫蠟試劑，不需要使用有毒的二甲苯，健康環(huán)保。
3. 能有效去除基因組DNA的污染，得到的RNA可直接用于RT-PCR反應(yīng)。
4. 即開(kāi)即用，客戶自己不需要準(zhǔn)備額外的試劑。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
溶液A	30mL
溶液B	3mL
溶液C	5mL
溶液D	15mL
微量核酸沉淀劑	30mL
RNase-free水	10mL
說(shuō)明書(shū)	1份

儲(chǔ)存條件：低溫運(yùn)輸，4℃保存(溶液C需要-20℃放置)，有效期一年。

使用方法：
1. 將5片厚度為6-8μM的石蠟包埋組織切片轉(zhuǎn)移到1.5mL塑料離心管(zuì好使用螺旋蓋離心管)中并加入1mL溶液A，在振蕩器上以zuì大速度振蕩10秒。
2. 加入75μL溶液B，在振蕩器上以zuì大速度振蕩10秒。
3. 7000×g室溫離心2分鐘，溶液將形成兩個(gè)相，其中組織切片位于下相。
4.小心吸棄上層液體。
5. 將離心管放入真空離心機(jī)中抽干下層的液體，一般需要一小時(shí)。
6. 加入150μL溶液C，55℃保溫過(guò)夜。
7. 短暫離心，95℃保溫10分鐘。
8. 加入0.5mL溶液D，充分震蕩半分鐘。
9. 加入0.1mL自備lǜ仿，振蕩器上充分振蕩混均30秒。
10. 13000-5000×g室溫離心3～5分鐘。
11. 將上清液(約0.6mL)轉(zhuǎn)移到另一干凈的1.5mL塑料離心管中。下層有機(jī)相(藍(lán)色)和中間層含有DNA和蛋白質(zhì)，避免觸及，否則將產(chǎn)生蛋白質(zhì)和DNA污染。為保險(xiǎn)起見(jiàn)，可以留下100μL上清液不取。同時(shí)吸取上清時(shí)zuì好緩慢進(jìn)行，否則容易吸出交界面的不可見(jiàn)的DNA。
12.在上清液中加入兩倍體積的微量核酸沉淀劑，振蕩器上振蕩30秒混勻。
13. 13000-15000g室溫離心5分鐘，離心底的側(cè)面將形成RNA沉淀。如果需要提高RNA回收率，可以將離心時(shí)間延長(zhǎng)到20或30分鐘。
14.小心吸棄上清液，注意不要吸棄RNA沉淀。
15.在含RNA沉淀的離心管中加入1mL自備的75%乙醇，振蕩混勻30秒。
16. 13000-15000g室溫離心1分鐘。
17.小心吸棄上清液，注意不要吸棄RNA沉淀。
18. 短暫快速離心，用移液槍小心吸棄殘留乙醇(約50μL)。注意不要吸棄沉淀。此步十分重要，否則殘留的乙醇會(huì)影響RNA的使用。
19.室溫放1-2分鐘后立即加入50-100μL RNA溶解液使RNA沉淀溶解。千萬(wàn)不要用真空離心法使RNA沉淀過(guò)于干燥，否則RNA將變得十分難溶。樣品立即使用或存放于-80℃待用。
20. RNA完整性的電泳檢測(cè)：
21. RNA產(chǎn)量產(chǎn)率測(cè)定：將5-10μL RNA溶于TE緩沖液中(pH7.5-8.2之間)檢測(cè)其在OD260的光吸收。通過(guò)光吸收可以得出RNA濃度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，進(jìn)而計(jì)算出RNA的產(chǎn)量(濃度×體積)和產(chǎn)率(RNA產(chǎn)量/組織用量)。
22. RNA純度測(cè)定：無(wú)污染的總RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān))，高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染，但一般不影響RT-PCR等反應(yīng)。

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