通用型總RNA提取試劑（含指示劑由北京百奧萊博供貨并提供相關(guān)技術(shù)服務(wù)支持，本品用于生化實(shí)驗(yàn)研究等領(lǐng)域，本品質(zhì)量穩(wěn)定，價(jià)位合理，需要通用型總RNA提取試劑（含指示劑等RNA提取純化產(chǎn)品的客戶(hù)，請(qǐng)到我公司官網(wǎng)聯(lián)系我們。...

特別提示：包括通用型總RNA提取試劑（含指示劑)在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱(chēng)：通用型總RNA提取試劑（含指示劑)
英文名稱(chēng)：Total RNA Extraction Reagent
產(chǎn)品貨號(hào)：WH0050
產(chǎn)品規(guī)格：100ml

本制品是在WH0065的基礎(chǔ)上zuì新推出的含有指示劑的總RNA提取試劑。該產(chǎn)品具有更強(qiáng)的裂解能力，更高的靈敏度，可從病毒、細(xì)菌、真菌、動(dòng)物和植物細(xì)胞、組織、體液等樣本中提取總RNA的試劑。本制品能夠充分裂解樣本、溶解細(xì)胞內(nèi)含物，并有效抑制RNase活性，提取樣本中的總RNA，同時(shí)保證了提取過(guò)程中RNA的完整性。該試劑對(duì)樣本起始量制，一個(gè)小時(shí)內(nèi)即可完成反應(yīng)。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
·提取質(zhì)量高：可在1h內(nèi)提取得率高、純度高、完整性好的總RNA
·添加指示劑：添加了特殊指示劑，離心分層后下層為粉紅色，便于吸取上清
·靈敏度高：對(duì)病毒等微量樣本的提取具有更高的提取效率
·樣品處理量靈活：既可用于少量樣品（50-100mg組織、5×10⁶細(xì)胞）的總RNA提取，也可用于大量樣品（≥ 1g組織或≥ 10⁷細(xì)胞）的總RNA提取。

下游應(yīng)用：
本制品提取的總RNAzuì大限度的消除了DNA和蛋白等雜質(zhì)的污染，可直接用于Northern Blot、DotBlot、PolyA篩選、體外翻譯、RNase保護(hù)分析、cDNA文庫(kù)構(gòu)建、RT-PCR、熒光定量PCR、高通量測(cè)序等各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

不同組織或細(xì)胞RNA提取預(yù)期得率：

材料	RNA得率
植物葉片	100–500μg/g葉片
動(dòng)物組織	6-10 μg/mg肝臟組織
動(dòng)植物培養(yǎng)細(xì)胞	5–10 μg/106細(xì)胞
血液	3–5 μg/ml人類(lèi)全血

保存條件：2–8℃避光保存12個(gè)月。

預(yù)防RNase污染，應(yīng)注意以下幾方面：
1．經(jīng)常更換新手套。因?yàn)槠つw經(jīng)常帶有細(xì)菌，可能導(dǎo)致RNase污染。
2．使用RNase-Free的塑料制品和槍頭避免交叉污染。
3．RNA在本制品中時(shí)不會(huì)被RNase降解。但提取后繼續(xù)處理過(guò)程中應(yīng)使用RNase-Free的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4h，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10min，然后用水徹底清洗，再滅菌，即可去除RNase。
4．配制溶液應(yīng)使用RNase-Free ddH2O。（將水加入到干凈的玻璃瓶中，加入DEPC至終濃度0.1%（V/V，放置過(guò)夜，高壓滅菌）。

注意事項(xiàng)：
1．勻漿后，加氯f(wàn)ǎng前，樣品可在-70℃放置一個(gè)月。
2．RNA沉淀可以保存在75%乙醇中，2-8℃一個(gè)星期以上或-20℃一年。

RNA提取操作步驟：
自備試劑：氯f(wàn)ǎng、異丙醇、RNase-Free ddH2O、75%乙醇（用RNase-Free ddH2O配制）

1．樣品處理
a．植物組織：以葉片RNA提取為例。取新鮮葉片在液氮中充分研磨或?qū)⑷~片剪碎后直接在本制品中研磨，研磨要迅速，zuì好不要超過(guò)1 min。大約100mg葉片使用1ml本制品。
b．動(dòng)物組織：以鼠肝臟RNA提取為例。取新鮮或-70℃凍存組織，每30-50 mg組織加入1ml本制品，用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積一般不要超過(guò)本制品體積的10%。
c．單層培養(yǎng)細(xì)胞：?jiǎn)螌淤N壁細(xì)胞的收集（收集細(xì)胞數(shù)量請(qǐng)不要超過(guò)1×10⁷）：可直接在培養(yǎng)容器中裂解（容器體積不超過(guò)10cm2）,或者使用胰蛋白酶處理后離心收集細(xì)胞沉淀。（在搖瓶中培養(yǎng)的單層貼壁細(xì)胞通常采用胰蛋白酶處理的方法）。
1)直接裂解法：直接在培養(yǎng)板中加入本制品裂解細(xì)胞，每10cm2面積加入1ml本制品。用取樣器吹打幾次。注意：本制品加量根據(jù)培養(yǎng)板面積決定，不是由細(xì)胞數(shù)決定。如果本制品加量不足，可能導(dǎo)致提取的RNA中有DNA污染。
2)胰蛋白酶處理法：確定細(xì)胞數(shù)量，吸除培養(yǎng)基，用PBS洗滌細(xì)胞，吸除PBS，向細(xì)胞中加入含有0.1-0.25%胰蛋白酶的PBS處理細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞脫離容器壁時(shí)，加入含有血清的培養(yǎng)基失活胰蛋白酶，將細(xì)胞溶液轉(zhuǎn)移至RNase-free的離心管中，300×g離心5 min，收集細(xì)胞沉淀，仔細(xì)吸除所有上清。
  注意：收集細(xì)胞時(shí)一定要將細(xì)胞培養(yǎng)液去除干凈，否則會(huì)導(dǎo)致裂解不完全，造成RNA的產(chǎn)量降低。
d．細(xì)胞懸液：離心取細(xì)胞。每5×10⁶～1×10⁷動(dòng)物細(xì)胞和植物細(xì)胞加入1ml本制品。加入本制品前不要洗滌細(xì)胞，以免降解mRNA。
e．血液與病毒液處理：直接取新鮮的血液或病毒液，加入3倍體積本制品（推薦0.2 ml全血或病毒液加入0.6 ml本制品)，充分振蕩混勻。
2．將勻漿樣品在室溫放置5 min，使得核酸蛋白復(fù)合物完全分離。
3．可選步驟：4℃ 12000rpm（~13400×g)離心10min，取上清。
  注意：如果樣品中含有較多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物結(jié)節(jié)部分等，可離心去除。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜、多糖、高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織樣品時(shí)，上層是大量油脂，應(yīng)除去。取澄清的勻漿溶液進(jìn)行下一步操作。
4．每使用1ml本制品加0.2 ml氯f(wàn)ǎng，蓋好管蓋，劇烈振蕩15 sec，室溫放置3 min。
  注意：如不能旋渦混勻，可手動(dòng)快速顛倒混勻2 min
5．4℃ 12000rpm（~13400×g)離心15 min。樣品會(huì)分成三層：粉色的有機(jī)相，中間層和上層無(wú)色的水相，RNA主要在水相中，把水相（約500μl）轉(zhuǎn)移到新的離心管中。（如果要分離DNA和蛋白質(zhì)，可向我公司索取提取方法）。
6．在得到的水相溶液中加入等體積異丙醇，混勻，室溫放置10min。
7．4℃ 12000rpm（~13400×g)離心10min，去上清。離心前RNA沉淀經(jīng)常是看不見(jiàn)的，離心后在管側(cè)和管底形成膠狀沉淀。
8．加入1ml 75%乙醇（用RNase-free ddH2O配制）洗滌沉淀。每使用1ml本制品至少用1ml 75%乙醇對(duì)沉淀進(jìn)行洗滌。
9．4℃ 10000rpm （~9,391×g)離心5 min。倒出液體，注意不要倒出沉淀，剩余的少量液體短暫離心，然后用槍頭吸出，注意不要吸棄沉淀。
10．室溫放置晾干（不要晾的過(guò)干，RNA完全干燥后會(huì)很難溶解，大約晾干2-3 min左右即可），根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，加入30-100 μl RNase-Free ddH2O，反復(fù)吹打、混勻，充分溶解RNA。

常見(jiàn)問(wèn)題解答：

低得率：
A．樣品裂解或勻漿處理不徹底。
B．zuì后得到的RNA沉淀未完全溶解。

A260/A280<1.65
A．檢測(cè)吸光度時(shí)，RNA樣品不是溶于TE，而是溶于水。低離子濃度和低pH條件下，A280值會(huì)較高。
B．樣品勻漿時(shí)加的試劑量太少。
C．勻漿后樣品未在室溫放置5 min。
D．水相中混有有機(jī)相。
E．zuì后得到的RNA沉淀未完全溶解。

RNA降解：
A．組織取出后沒(méi)有馬上處理或冷凍。
B．樣品或提取的RNA沉淀保存于-5℃– -20℃，未在-60℃– -70℃保存。
C．細(xì)胞在胰蛋白酶處理時(shí)被破壞。
D．溶液或離心管未經(jīng)RNase去除處理。
E．電泳時(shí)使用的甲酰胺pH低于3.5。

DNA污染：
A．樣品勻漿時(shí)加的試劑體積太少。
B．樣品中含有組織溶劑（如乙醇，DMSO等），強(qiáng)緩沖液或堿性溶液。

蛋白和多糖污染：
A．樣品中蛋白、多糖含量高。
B．樣品量太大。
C．水相中混有有機(jī)相。

根據(jù)您的關(guān)注的通用型總RNA提取試劑（含指示劑)，總RNA抽提試劑，您可能還對(duì)以下產(chǎn)品有需求：

貨號(hào)	名稱(chēng)	規(guī)格
BTN111202	非凍型血液RNA保存液	100mL
BTN160906	植物RNA提取試劑盒(無(wú)酚無(wú)氯f(wàn)ǎng柱式提取)	50次
BTN130845	柱式分枝桿菌RNA提取試劑盒	50次
BTN80103	柱式細(xì)菌RNA提取試劑盒	50次
BTN60604	DEPC處理水	250mL
BTN3190	水飽和酚	100mL
YT526	YTM 總RNA抽提試劑(Trizol法)	100ml

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名稱(chēng)：石蠟包埋組織RNA提取試劑盒
貨號(hào)：BTN81102
規(guī)格：30次
石蠟包埋組織本是珍貴的分子生物學(xué)研究材料，但是由于它們的保存時(shí)間一般都比較長(zhǎng)，很不容易從中提取到可以進(jìn)行PCR的RNA，存在的主要問(wèn)題是RNA的降解和脫蠟過(guò)程中樣品的丟失。本產(chǎn)品是專(zhuān)門(mén)用于從甲醛和非甲醛固定的石蠟包埋組織中快提RNA的試劑

試劑盒特點(diǎn)：
1.一管式操作，避免了可能的交叉污染和樣品RNA的丟失。
2.含一步離心式脫蠟試劑，不需要使用有毒的二甲苯，健康環(huán)保。
3. 能有效去除基因組DNA的污染，得到的RNA可直接用于RT-PCR反應(yīng)。
4. 即開(kāi)即用，客戶(hù)自己不需要準(zhǔn)備額外的試劑。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
溶液A	30mL
溶液B	3mL
溶液C	5mL
溶液D	15mL
微量核酸沉淀劑	30mL
RNase-free水	10mL
說(shuō)明書(shū)	1份

儲(chǔ)存條件：低溫運(yùn)輸，4℃保存(溶液C需要-20℃放置)，有效期一年。

使用方法：
1. 將5片厚度為6-8μM的石蠟包埋組織切片轉(zhuǎn)移到1.5mL塑料離心管(zuì好使用螺旋蓋離心管)中并加入1mL溶液A，在振蕩器上以zuì大速度振蕩10秒。
2. 加入75μL溶液B，在振蕩器上以zuì大速度振蕩10秒。
3. 7000×g室溫離心2分鐘，溶液將形成兩個(gè)相，其中組織切片位于下相。
4.小心吸棄上層液體。
5. 將離心管放入真空離心機(jī)中抽干下層的液體，一般需要一小時(shí)。
6. 加入150μL溶液C，55℃保溫過(guò)夜。
7. 短暫離心，95℃保溫10分鐘。
8. 加入0.5mL溶液D，充分震蕩半分鐘。
9. 加入0.1mL自備氯f(wàn)ǎng，振蕩器上充分振蕩混均30秒。
10. 13000-5000×g室溫離心3～5分鐘。
11. 將上清液(約0.6mL)轉(zhuǎn)移到另一干凈的1.5mL塑料離心管中。下層有機(jī)相(藍(lán)色)和中間層含有DNA和蛋白質(zhì)，避免觸及，否則將產(chǎn)生蛋白質(zhì)和DNA污染。為保險(xiǎn)起見(jiàn)，可以留下100μL上清液不取。同時(shí)吸取上清時(shí)zuì好緩慢進(jìn)行，否則容易吸出交界面的不可見(jiàn)的DNA。
12.在上清液中加入兩倍體積的微量核酸沉淀劑，振蕩器上振蕩30秒混勻。
13. 13000-15000g室溫離心5分鐘，離心底的側(cè)面將形成RNA沉淀。如果需要提高RNA回收率，可以將離心時(shí)間延長(zhǎng)到20或30分鐘。
14.小心吸棄上清液，注意不要吸棄RNA沉淀。
15.在含RNA沉淀的離心管中加入1mL自備的75%乙醇，振蕩混勻30秒。
16. 13000-15000g室溫離心1分鐘。
17.小心吸棄上清液，注意不要吸棄RNA沉淀。
18. 短暫快速離心，用移液槍小心吸棄殘留乙醇(約50μL)。注意不要吸棄沉淀。此步十分重要，否則殘留的乙醇會(huì)影響RNA的使用。
19.室溫放1-2分鐘后立即加入50-100μL RNA溶解液使RNA沉淀溶解。千萬(wàn)不要用真空離心法使RNA沉淀過(guò)于干燥，否則RNA將變得十分難溶。樣品立即使用或存放于-80℃待用。
20. RNA完整性的電泳檢測(cè)：
21. RNA產(chǎn)量產(chǎn)率測(cè)定：將5-10μL RNA溶于TE緩沖液中(pH7.5-8.2之間)檢測(cè)其在OD260的光吸收。通過(guò)光吸收可以得出RNA濃度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，進(jìn)而計(jì)算出RNA的產(chǎn)量(濃度×體積)和產(chǎn)率(RNA產(chǎn)量/組織用量)。
22. RNA純度測(cè)定：無(wú)污染的總RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān))，高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染，但一般不影響RT-PCR等反應(yīng)。

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