HR0241 細(xì)胞漿/胞核分離試劑盒

細(xì)胞核/胞漿分離試劑盒可以從哺乳動(dòng)物細(xì)胞中分離細(xì)胞核和胞漿組分。此試劑盒提供了一個(gè)系統(tǒng),維持核和胞漿組分是分開和完整的。優(yōu)化的試劑配方和程序可以快速分離胞核和胞漿,而幾乎沒有交叉污染。本試劑盒提取的胞核和胞漿組分仍保持其生化功能,適合下游分析如轉(zhuǎn)錄活性,RNA拼接,gel-shift分析,報(bào)告分析,酶活性分析和...
細(xì)胞漿/胞核分離試劑盒
產(chǎn)品編號(hào):HR0241
產(chǎn)品組成:
組份 |
50T |
100T |
組分A:提取液A |
20mL |
40mL |
組分B:核保存液B |
10mL |
20mL |
組分C:蛋白酶抑制劑混合物 |
100μL |
200μL |
細(xì)胞漿/胞核分離試劑盒保存條件:
提取液、核保存液2-8℃保存;蛋白酶抑制劑-20℃保存。有效期1年。
【注】:
● 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。
● 蛋白酶抑制劑在2-8℃時(shí)是固體狀態(tài),從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴,變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
● 試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完。
產(chǎn)品說明:
細(xì)胞核/胞漿分離試劑盒可以從哺乳動(dòng)物細(xì)胞中分離細(xì)胞核和胞漿組分。此試劑盒提供了一個(gè)系統(tǒng),維持核和胞漿組分是分開和完整的。優(yōu)化的試劑配方和程序可以快速分離胞核和胞漿,而幾乎沒有交叉污染。
本試劑盒提取的胞核和胞漿組分仍保持其生化功能,適合下游分析如轉(zhuǎn)錄活性,RNA拼接,gel-shift分析,報(bào)告分析,酶活性分析和WB等。
試劑盒以外自備試劑和儀器:
● 離心機(jī) ● 振蕩器 ● 渦旋混勻器 ● PBS ● 蛋白定量試劑盒
使用注意事項(xiàng):
● 預(yù)實(shí)驗(yàn)很重要。必須要做預(yù)實(shí)驗(yàn),在正式實(shí)驗(yàn)之前取少量樣本優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件,并像正式樣本一樣認(rèn)真進(jìn)行,看實(shí)驗(yàn)結(jié)果是否可行,實(shí)驗(yàn)條件是否適合自己的樣本。由于生物樣本的多樣性,不同贗本的實(shí)驗(yàn)條件通常差異較大,同種細(xì)胞的不同模型下需要的實(shí)驗(yàn)條件也可能不同,為了避免浪費(fèi)正式樣本和試劑,一定要提前預(yù)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件。
● 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心,將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底,避免開蓋時(shí)液體灑落。
● 實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷;所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過程須保持樣品處于低溫。
● 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀,不影響使用,溶解后正常使用。
● 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
細(xì)胞漿/胞核分離試劑盒使用方法:
1、取5-10×106個(gè)細(xì)胞,在4℃,500×g條件下離心3分鐘,小心吸取培養(yǎng)基,盡可能吸干,收集細(xì)胞。
2、用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次,每次洗滌后盡可能吸干上清。
【注】:
● 在4℃,500×g條件下離心5分鐘。
3、在細(xì)胞沉淀中加入400μL冷的提取液A,渦旋振蕩混勻或吹打混勻,置冰上振蕩20-30分鐘。
● 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速,提取液能輕微晃動(dòng)即可。
● 如果沒有振蕩條件,也可冰上靜置,稍微延長(zhǎng)處理時(shí)間,中間每隔5分鐘渦旋振蕩或移液器吹打混勻。
● 細(xì)胞數(shù)量根據(jù)實(shí)驗(yàn)情況調(diào)整,每次的提取液用量并不是一定的,大約為細(xì)胞體積的5-10倍即可,請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整。
● 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要在每400μL提取液A中加入2μL蛋白酶抑制劑。
4、在4℃,1200×g條件下離心5分鐘。
5、將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管,即得到胞漿組分,請(qǐng)置冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。
6、沉淀用PBS重懸,然后在4℃,2000×g 條件下離心5分鐘,棄上清。
7、沉淀為細(xì)胞核組分,將沉淀用200μL保存液B 重懸后保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。
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