昆蟲(chóng)組蛋白提取試劑盒適用于從各種昆蟲(chóng)組織樣本中提取組蛋白。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便。組蛋白提取產(chǎn)物的產(chǎn)量大約0.4mg每100mg組織/每107個(gè)細(xì)胞,不同的細(xì)胞和組織中,產(chǎn)量差異很大。提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、組蛋白修飾實(shí)驗(yàn)比如乙?；⒓谆?、sumoylation等下游蛋白研究。...

昆蟲(chóng)組蛋白提取試劑盒

 

產(chǎn)品編號(hào)：HR0037

產(chǎn)品組成：

昆蟲(chóng)組蛋白提取試劑盒儲(chǔ)存條件：

蛋白提取液A 2-8℃,蛋白提取液B、C室溫,蛋白酶抑制劑-20℃保存。有效期1年。

【注】：

● 蛋白酶抑制劑未開(kāi)蓋使用前也可以2-8℃保存,開(kāi)蓋使用后-20℃保存。

● 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài),從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴,變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開(kāi)蓋。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

昆蟲(chóng)組蛋白提取試劑盒適用于從各種昆蟲(chóng)組織樣本中提取組蛋白。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便。

組蛋白提取產(chǎn)物的產(chǎn)量大約0.4mg每100mg組織/每10⁷個(gè)細(xì)胞,不同的細(xì)胞和組織中,產(chǎn)量差異很大。

提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、組蛋白修飾實(shí)驗(yàn)比如乙酰化、甲基化、sumoylation等下游蛋白研究。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

● 使用方便,不需經(jīng)過(guò)研磨、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理。

● 含蛋白穩(wěn)定劑,提取的蛋白穩(wěn)定。

● 紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí),背景干擾低。

● 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含7種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

試劑盒以外自備試劑和儀器：

● 離心機(jī) ● 振蕩器 ● Dounce勻漿機(jī)/勻漿器 ● 渦旋混勻器 ● PBS（pH7.4） ● 蛋白定量試劑盒

使用注意事項(xiàng)：

● 旋帽離心管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心,將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底,避免開(kāi)蓋時(shí)液體灑落。

● 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫。

● 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀,不影響使用,溶解后正常使用。

● 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其他蛋白酶抑制劑單品。

使用方法：

昆蟲(chóng)組蛋白提取試劑盒細(xì)胞組蛋白提?。?

1、提取液制備：

每500μL冷的蛋白提取液A中加入2μL蛋白酶抑制劑混合物混勻后置冰上備用。

【注】：

● 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液,蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

● 加過(guò)蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完,再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

● 以下步驟中使用的蛋白提取液為此步配制好的含蛋白酶抑制劑的提取液。

2、收集5-10×10⁶個(gè)細(xì)胞,在4℃,1000×g條件下離心5-10分鐘,吸干上清,收集細(xì)胞。

3、用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次,每次洗滌后盡可能吸干上清。

4、每5-10×10⁶個(gè)細(xì)胞種加入500μL蛋白提取液A,混勻后,在4℃條件下輕輕振蕩20-30分鐘。

【注】：

● 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速,提取液能輕微晃動(dòng)即可。

● 沒(méi)有振蕩條件也可以不振蕩,稍微延長(zhǎng)提取液的的處理時(shí)間,中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻即可。

5、在4℃,16000×g條件下離心15分鐘,棄上清。

6、在沉淀中加入100μL組蛋白提取液B。

7、用200μL槍頭反復(fù)吹打混勻或充分渦旋振蕩混勻。

8、置4℃冰箱過(guò)夜存放。

9、16000×g條件下離心10分鐘,收集上清。

10、在上清中加入10-25μL試劑C充分混勻。

11、加入上樣緩沖液混勻后煮沸,分裝于-80℃冰箱保存或直接用于下游實(shí)驗(yàn)。

【注】：

● 加入上樣緩沖液后應(yīng)為上樣緩沖液的藍(lán)色,如果顏色變黃,可以再加入試劑C混勻,每次加入5μL,至恢復(fù)藍(lán)色為止。

組織組蛋白提取：

1、提取液制備：

每500μL冷的蛋白提取液A中加入2μL蛋白酶抑制劑混合物混勻后置冰上備用。

【注】：

● 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液,蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

● 加過(guò)蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完,再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

● 以下步驟中使用的蛋白提取液為此步配制好的含蛋白酶抑制劑的提取液。

2、取100mg組織樣本剪碎,加入500μL蛋白提取液A,用組織勻漿器/勻漿機(jī)充分勻漿至無(wú)明顯大塊固體。

3、將組織勻漿吸入一預(yù)冷的干凈離心管中,在4℃條件下輕輕振蕩20-30分鐘。

【注】：

● 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速,提取液能輕微晃動(dòng)即可。

● 沒(méi)有振蕩條件也可以不振蕩,稍微延長(zhǎng)提取液的的處理時(shí)間,中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻即可。

4、在4℃,16000×g條件下離心15分鐘,棄上清。

5、在沉淀中加入100μL組蛋白提取液B。

6、用200μL槍頭反復(fù)吹打混勻或充分渦旋振蕩混勻,置4℃冰箱過(guò)夜存放。

7、16000×g條件下離心10分鐘,收集上清。

8、在上清中加入25μL試劑C充分混勻。

9、加入上樣緩沖液混勻后煮沸,分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

【注】：

● 加入上樣緩沖液后應(yīng)為上樣緩沖液的藍(lán)色,如果顏色變黃,可以再加入試劑C混勻,每次加入5μL,至恢復(fù)藍(lán)色為止。

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