M01細(xì)胞膜染色試劑盒是利用M01探針進行細(xì)胞膜特異性染色的試劑盒。本試劑盒中的M01細(xì)胞膜染色探針為綠色熒光標(biāo)記的細(xì)胞膜探針，具有488/500nm的最大激發(fā)/發(fā)射波長。當(dāng)親脂性的綠色熒光探針M01進入細(xì)胞膜后，在整個細(xì)胞膜上擴散，最佳濃度時可以使整個細(xì)胞膜染色。...

細(xì)胞膜染色試劑盒(綠色熒光)-M01

 

產(chǎn)品編號：HR8433

產(chǎn)品組成：

儲存條件：

染料-20℃避光保存；避免反復(fù)凍融；稀釋液2-8℃保存。有效期6個月。

【注】：

● 染料短期2周內(nèi)可以2-8℃保存，長期不用可以-20℃保存，避免反復(fù)凍融。

● 染色液A為DMSO溶液，冬季氣溫較低時為凝固狀態(tài)，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱融解，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。

● 可以用手捂住使其融解或37℃短時間水浴。吸頭也需要放在培養(yǎng)箱預(yù)熱，否則容易再次凝固在吸頭內(nèi)壁產(chǎn)生損耗。

細(xì)胞膜染色試劑盒(綠色熒光)-M01產(chǎn)品簡介：

M01細(xì)胞膜染色試劑盒是利用M01探針進行細(xì)胞膜特異性染色的試劑盒。本試劑盒中的M01細(xì)胞膜染色探針為綠色熒光標(biāo)記的細(xì)胞膜探針，具有488/500nm的最大激發(fā)/發(fā)射波長。

當(dāng)親脂性的綠色熒光探針M01進入細(xì)胞膜后，在整個細(xì)胞膜上擴散，最佳濃度時可以使整個細(xì)胞膜染色。染色液M01在進入細(xì)胞膜之前熒光非常弱，當(dāng)與細(xì)胞膜結(jié)合后其熒光強度大大增強，被激發(fā)后可以發(fā)出綠色的熒光，具有很高的淬滅常數(shù)和激發(fā)態(tài)壽命。

熒光探針M01通常不會明顯影響細(xì)胞的活力，因此被廣泛用于正向或逆向的，活的或固定的神經(jīng)等細(xì)胞或組織的示蹤劑或長期示蹤劑（long-term tracer）。除了最簡單的細(xì)胞膜熒光標(biāo)記外，還可以用于檢測細(xì)胞的融合和粘附，檢測發(fā)育或移植過程中細(xì)胞遷移，通過FRAP（Fluorescence Recovery After Photobleaching）檢測脂在細(xì)胞膜上的擴散，檢測細(xì)胞毒性和標(biāo)記脂蛋白等。

以96孔板每孔200μL染色液計，本試劑盒小包裝可以染色1000-5000個樣本。

檢測方法：

● 流式細(xì)胞儀 ● 熒光顯微鏡 ● 激光共聚焦

樣本類型：

● 懸浮細(xì)胞 ● 貼壁細(xì)胞

試劑盒以外自備試劑和儀器：

● 熒光顯微鏡/激光共聚焦 ● 離心機 ● 移液器 ● PBS ● HBSS(無酚紅) 

使用注意事項：

● 螺旋蓋微量管裝試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底，避免開蓋時液體灑落。

● 細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。

● 標(biāo)記的條件因細(xì)胞種類而異，根據(jù)不同樣本的實際染色結(jié)果做相應(yīng)調(diào)整，在每次實驗前，請先根據(jù)不同的實驗要求、細(xì)胞類型、細(xì)胞的膜通透性等進行優(yōu)化，確定最佳條件。以下方法及供參考。

● 染色后立即進行分析。

● 本染色液可用于細(xì)胞涂片、細(xì)胞的檢測。

使用方法：

一、染色工作液的配制：

根據(jù)樣本數(shù)量，用37℃培養(yǎng)箱預(yù)熱染料稀釋液試劑B將M01熒光染料10倍稀釋。再用相應(yīng)的無血清培養(yǎng)基或其他緩沖液（如HBSS、PBS等）將探針M01進行40-200倍稀釋，配制成染色工作液。

【注】：

● 也可不用本盒中的試劑B，直接用相應(yīng)的無血清培養(yǎng)基或HBSS等緩沖液稀釋M01染料至所需濃度。

● 開始實驗前，使用無血清培養(yǎng)基或HBSS緩沖液稀釋染料儲存液到需要的工作濃度。工作濃度應(yīng)根據(jù)不同細(xì)胞的預(yù)實驗結(jié)果確定的最佳工作濃度，建議至少在超過10倍范圍的濃度下進行測試。一般染色終濃度400-2000倍稀釋，1000-2000倍適合大多數(shù)細(xì)胞樣本。

● 建議收到產(chǎn)品后，根據(jù)使用量，對母液進行小量分裝，每次使用一管，試劑-20℃避光凍存，一年穩(wěn)定。

● 工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。

● 為了降低探針加載過度可能引起的假陽性，建議在不影響染色效果的情況下盡量使用低濃度。

● 若細(xì)胞在染色后于不含染料的培養(yǎng)基中孵育，熒光信號會衰減。

細(xì)胞膜染色試劑盒(綠色熒光)-M01二、細(xì)胞染色

A：懸浮細(xì)胞染色

1、用PBS洗滌細(xì)胞2次。

【注】：

● 500×g離心5分鐘。

2、加入適量體積的染色工作液重懸細(xì)胞，使其密度大約為1×10⁶/mL。

3、在37℃孵育細(xì)胞5～20分鐘，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時間不同?？梢杂?0分鐘作為起始孵育時間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記結(jié)果。

【注】：

● 若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長染色時間。

4、孵育結(jié)束，500×g離心5分鐘。

5、傾倒上清液，再次緩慢加入37℃預(yù)熱的培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。

6、重復(fù)（4），（5）步驟兩次以上

B：貼壁細(xì)胞染色

1、用PBS洗滌細(xì)胞2次。

2、細(xì)胞培養(yǎng)板中或細(xì)胞爬片上加入適量體積的染色工作液。

【注】：

● 96孔細(xì)胞培養(yǎng)板每孔加入100μL染色液即可。

3、37℃孵育細(xì)胞5～20分鐘，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時間不同?？梢杂?0分鐘作為起始孵育時間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記結(jié)果。

【注】：

● 若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長染色時間。

4、吸干染色工作液，用培養(yǎng)液洗培養(yǎng)板或蓋玻片2～3次，每次用預(yù)熱的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞，孵育5～10分鐘，然后吸干培養(yǎng)基。

三、用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測

最大激發(fā)波長為488nm，最大發(fā)射波長為500nm。

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