在激發(fā)波長(zhǎng)488 nm，發(fā)射波長(zhǎng)520 nm附近，使用熒光分光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)儀、等檢測(cè)DCFHDA產(chǎn)物熒光，從而測(cè)定組織內(nèi)活性氧水平。一般最好使用新鮮組織樣本檢測(cè)活性氧，反映的是組織當(dāng)時(shí)的活性氧狀態(tài)。凍存的組織樣本的ROS在長(zhǎng)期凍存過程中會(huì)損失掉，有條件的話就使用新鮮樣本，不建議使用凍存的樣本。已經(jīng)凍存的組織樣本中殘...

組織活性氧檢測(cè)試劑盒(DCFHDA)

 

產(chǎn)品編號(hào)：HR9079

產(chǎn)品組成：

儲(chǔ)存條件：

勻漿液2-8℃保存；探針-20℃避光保存。有效期6個(gè)月。

【注】：

● 染料2周內(nèi)可2-8℃保存，長(zhǎng)期不用可以-20℃保存。避免反復(fù)凍融。

● 探針為DMSO溶液，冬季氣溫較低時(shí)為凝固狀態(tài)，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱融解，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。

● 可以用手捂住使其融解或37℃短時(shí)間水浴。吸頭也需要放在培養(yǎng)箱預(yù)熱，否者容易再次凝固在吸頭內(nèi)壁產(chǎn)生損耗。

組織活性氧檢測(cè)試劑盒(DCFHDA)產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括超氧自由基、過氧化氫、及其下游產(chǎn)物過氧化物和羥化物等，參與細(xì)胞生長(zhǎng)增殖、發(fā)育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程。

組織活性氧檢測(cè)試劑盒是一種利用熒光探針DCFHDA進(jìn)行組織活性氧檢測(cè)的試劑盒。本試劑盒中的DCFHDA ROS探針為綠色熒光的活性氧探針，具有488/520nm的最大激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)。

DCFHDA ROS探針在組織中活性氧存在的條件下，被氧化生成綠色熒光物質(zhì)，綠色熒光強(qiáng)度與組織內(nèi)活性氧水平成正比，檢測(cè)DCFHDA產(chǎn)物的熒光就可以知道組織內(nèi)活性氧的水平。

在激發(fā)波長(zhǎng)488 nm，發(fā)射波長(zhǎng)520 nm附近，使用熒光分光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)儀、等檢測(cè)DCFHDA產(chǎn)物熒光，從而測(cè)定組織內(nèi)活性氧水平。

一般最好使用新鮮組織樣本檢測(cè)活性氧，反映的是組織當(dāng)時(shí)的活性氧狀態(tài)。凍存的組織樣本的ROS在長(zhǎng)期凍存過程中會(huì)損失掉，有條件的話就使用新鮮樣本，不建議使用凍存的樣本。已經(jīng)凍存的組織樣本中殘余的ROS也可以用本試劑盒檢測(cè)。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

● 使用方便：可用熒光分光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)；

● 背景低，靈敏度高；

● 線性范圍寬，使用方便。

檢測(cè)方法：

● 熒光分光光度計(jì) ● 熒光酶標(biāo)儀

樣本類型：

● 新鮮組織 ● 凍存組織

試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：

● 熒光分光光度計(jì)/熒光酶標(biāo)儀 ● PBS/HBSS(無酚紅) ● 蛋白定量試劑盒 ● 熒光檢測(cè)專用黑色96孔板

使用注意事項(xiàng)：

● 螺旋蓋微量管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。

● DCFHDA探針染色液為DMSO溶液，冬季氣溫較低時(shí)在室溫時(shí)為凝固狀態(tài)，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱溶解，吸頭也需要放在培養(yǎng)箱預(yù)熱，否者容易再次凝固在吸頭內(nèi)壁產(chǎn)生損耗。

● 使用前，先將本品取出回溫至室溫，并對(duì)其進(jìn)行簡(jiǎn)短離心使DMSO溶液集中于管底。

● 盡量縮短探針標(biāo)記后到測(cè)定所用的時(shí)間，以減少各種可能的誤差。

使用方法：

試劑準(zhǔn)備：

根據(jù)樣本數(shù)量，用純水將DCFHDA探針10倍稀釋。充分混勻，備用。

【注】：

● 不可以一次性將探針全部稀釋。

● 現(xiàn)配現(xiàn)用。

組織活性氧檢測(cè)試劑盒(DCFHDA)樣本處理：

1、剛?cè)〉玫男迈r組織樣本用PBS洗凈。

2、準(zhǔn)確稱取50-100mg組織，加入1mL勻漿緩沖液A，用勻漿器/勻漿機(jī)充分勻漿。

3、在100×g，4℃離心3分鐘，棄沉淀，取上清。

樣本檢測(cè)：

1、在96孔板中加入190μL勻漿上清液、10μL DCFHDA探針，用移液器吹打，使之充分混勻。

2、在37℃避光孵育30分鐘。

3、置于熒光酶標(biāo)儀中，后于激發(fā)波長(zhǎng)為488nm、發(fā)射波長(zhǎng)530nm檢測(cè)熒光強(qiáng)度。

【注】：

● 或使用熒光分光光度計(jì)等其他熒光檢測(cè)設(shè)備。

● 必須使用熒光檢測(cè)專用的黑色96孔板。

● 如熒光強(qiáng)度太強(qiáng)，超過了儀器的檢測(cè)范圍，可將孵育后的勻漿上清液稀釋后再檢測(cè)。一般稀釋5-50倍。

蛋白定量：

1、另取50μL上清勻漿液，用PBS大約稀釋30倍。

2、取100μL進(jìn)行蛋白定量。

結(jié)果處理：

以熒光強(qiáng)度（RFU）/蛋白濃度（毫克蛋白）表示組織活性氧強(qiáng)度。

【注】：

● 數(shù)據(jù)與蛋白濃度的單位無關(guān)。

● 此處以蛋白濃度數(shù)據(jù)作為校正系數(shù)，對(duì)不同樣品進(jìn)行均一化處理。

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