HR8786 ROS活性氧檢測試劑盒(cellRox Green)
- 產(chǎn)品/服務(wù)：HR8786 ROS活性氧檢測試劑盒(cellRox Green)
- 型 號：HR8786
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-08-28
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數(shù)：999
本產(chǎn)品中的CellROX Green本身熒光較弱，可自由透過活細胞膜進入細胞內(nèi)，并被細胞內(nèi)的ROS氧化，氧化產(chǎn)物可摻入染色體DNA中，熒光強度增大，產(chǎn)生明亮的綠色熒光。根據(jù)活細胞中綠色熒光的產(chǎn)生，可以判斷細胞ROS含量的多少和變化。用流式細胞儀或熒光顯微鏡可直接觀察，是一種快速簡便的組織或培養(yǎng)活細胞中ROS經(jīng)典檢測方法。...
ROS活性氧檢測試劑盒(cellRox Green)
產(chǎn)品編號：HR8786
產(chǎn)品組成：
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組份 |
200-1000T |
400-2000T |
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組份A：CellROX Green熒光探針 |
100μL |
100μL×2 |
保存條件：
-20℃避光保存。有效期6個月。
【注】：
● 探針長期不用可以-20℃保存，避免反復(fù)凍融，可以根據(jù)需要分裝后凍存。
● 染色液A為DMSO溶液，冬季氣溫較低時為凝固狀態(tài)，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱融解，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
● 可以用手捂住使其融解或37℃短時間水浴。吸頭也需要放在培養(yǎng)箱預(yù)熱，否則容易再次凝固在吸頭內(nèi)壁產(chǎn)生損耗。
產(chǎn)品簡介：
活性氧(ROS)的產(chǎn)生主要是氧化磷酸化的結(jié)果，在呼吸鏈中，在某些位點會有“泄露”的電子直接和氧氣或和其他電子受體反應(yīng)，在酶或非酶作用下引發(fā)一系列反應(yīng)生成不同種類的活性氧：“泄露”的電子最初和氧氣反應(yīng)生成超氧陰離子自由基(O2·-)。超氧陰離子遇水生成H2O2，同時過氧化氫也可由氧氣在單胺氧化酶(MAO)的作用下生成，生成的過氧化氫在髓過氧化物酶(MPO)的催化下與Cl-反應(yīng)可生成ClO-，在鐵或銅離子的催化下發(fā)生Fenton反應(yīng)生成OH·，超氧陰離子遇氮氧化物反應(yīng)生成ONOO-。這些生成的高氧化活性的物質(zhì)統(tǒng)稱為活性氧。
本產(chǎn)品中的CellROX Green本身熒光較弱，可自由透過活細胞膜進入細胞內(nèi)，并被細胞內(nèi)的ROS氧化，氧化產(chǎn)物可摻入染色體DNA中，熒光強度增大，產(chǎn)生明亮的綠色熒光。根據(jù)活細胞中綠色熒光的產(chǎn)生，可以判斷細胞ROS含量的多少和變化。用流式細胞儀或熒光顯微鏡可直接觀察，是一種快速簡便的組織或培養(yǎng)活細胞中ROS經(jīng)典檢測方法。在激發(fā)波長488nm，發(fā)射波長520nm附近，使用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、熒光分光光度計、熒光酶標儀、流式細胞儀等檢測熒光，從而測定細胞內(nèi)活性氧水平。
ROS活性氧檢測試劑盒(cellRox Green)產(chǎn)品特點：
● 使用方便：可用激光共聚焦顯微鏡直接觀察、熒光分光光度計、熒光酶標儀或流式細胞儀檢測；
● 背景低，靈敏度高；
● 線性范圍寬，使用方便。
檢測方法：
● 流式細胞儀 ● 熒光顯微鏡 ● 激光共聚焦 ● 熒光酶標儀 ● 熒光光度計
樣本類型：
● 懸浮細胞 ● 貼壁細胞
試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：
● 激光共聚焦顯微鏡或熒光分光光度計或酶標儀或流式細胞儀，激發(fā)波長488nm，發(fā)射波長520nm。
● 離心機 ● 移液器 ● PBS緩沖液 ● 或者HBSS（無酚紅） ● 黑色96孔板
使用注意事項：
● 螺旋蓋微量管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底，避免開蓋時液體灑落。
● 熒光探針標記后，一定要洗凈殘余的未進入細胞內(nèi)的探針，否則會導(dǎo)致背景較高。
● 探針標記完畢并洗凈殘余探針后，可以進行激發(fā)波長的掃描和發(fā)射波長的掃描，以確認探針的標記情況是否正常。
● 盡量縮短探針標記后到測定所用的時間，以減少各種可能的誤差。
● CellROX Green在光照和空氣中易被氧化，注意避光密閉保存。
● 對不同的細胞和組織，應(yīng)選擇合適的孵育時間和濃度，以觀察ROS的變化，很多細胞內(nèi)的ROS絕對水平較低，需要根據(jù)實際情況適當延長孵育時間。
● CellROX Green探針可以根據(jù)需要的用量分裝后凍存，避免反復(fù)凍融。
● CellROX Green不可以一次性全部稀釋后長期保存不用，稀釋后穩(wěn)定性變差，有效期縮短。
● 標記的條件因細胞種類而異，根據(jù)不同樣本的實際染色結(jié)果做相應(yīng)調(diào)整，在每次實驗前，請先根據(jù)不同的實驗要求、細胞類型、細胞的膜通透性等進行優(yōu)化，確定最佳條件。以下方法僅供參考。
● 原位檢測必須使用熒光檢測專用的黑色透明底96孔細胞培養(yǎng)板。
使用方法：
CellROX Green探針配制：
根據(jù)需要用量，用新鮮無酚紅無血清培養(yǎng)基或HBSS稀釋CellROX Green探針后充分混勻，避光保存?zhèn)溆谩?
2、探針使用終濃度200-1000倍稀釋。一般預(yù)實驗起始濃度按500倍即可。
【注】：
● 不能用含有血清的培養(yǎng)基稀釋探針。
● 也可以用HBSS緩沖液或PBS稀釋探針。
● 如果熒光太強，超過儀器的檢測范圍，可以按照1:1000-5000稀釋探針。
CellROX Green探針標記：
1、CellROX Green溶液可在新鮮無血清培養(yǎng)基、HBSS緩沖液或組織灌流液中稀釋到所需濃度，終濃度200-1000倍稀釋，以此染色液更換細胞培養(yǎng)基或灌流液；也可直接向無血清細胞孵育液體或灌流液中加入CellROX Green探針溶液至所需濃度。
【注】：
● 檢測貼壁細胞時，熒光顯微鏡檢測可以原位染色也可以消化下來后染色，流式檢測消化下來后染色。
2、依據(jù)細胞ROS含量的不同，CellROX Green終濃度可選擇在200-1000倍稀釋的范圍，孵育時間可選擇30分鐘-4小時，在37℃或室溫進行避光孵育。
【注】：
● 如果熒光太強，超過儀器的檢測范圍，可以按照1:1000-5000稀釋探針。
3、孵育結(jié)束后，用PBS等新鮮緩沖液清洗細胞或組織。漂洗時間要短。
【注】：
● 也可以用HBSS/PBS洗滌細胞。
ROS活性氧檢測試劑盒(cellRox Green)熒光顯微鏡觀察：
1、對貼壁生長細胞或活組織，可直接在熒光顯微鏡下觀察；對懸浮生長細胞，取25-50μL細胞懸液滴到一張顯微載玻片上，再蓋上一張蓋玻片。
2、熒光顯微鏡下觀察。
流式細胞儀分析：
1、染色并洗滌細胞后用0.5～1 mL冷PBS重懸細胞（5～10萬）。
2、采用488nm波長激發(fā)，發(fā)射波長520 nm，測定待測細胞平均熒光強度。
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