高脂肪樣本蛋白提取試劑盒適用于從各種脂肪含量高的細胞和實體組織，如脂肪細胞、脂肪肝細胞、腦、脂肪、脂肪肝臟、結(jié)締組織、胸腺組織等動物組織中提取總蛋白。提取過程簡單方便，可在1小時內(nèi)完成。

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高脂肪樣本蛋白提取試劑盒

 

產(chǎn)品編號：HR0119

產(chǎn)品組成：

儲存條件：

蛋白提取液2-8℃保存；離心柱室溫保存；蛋白酶抑制劑-20℃保存。有效期1年。

【注】：

● 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。

● 蛋白酶抑制劑在2-8℃時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。

產(chǎn)品簡介：

高脂肪樣本蛋白提取試劑盒適用于從各種脂肪含量高的細胞和實體組織，如脂肪細胞、脂肪肝細胞、腦、脂肪、脂肪肝臟、結(jié)締組織、胸腺組織等動物組織中提取總蛋白。提取過程簡單方便，可在1小時內(nèi)完成。

本試劑盒含有的獨特配方能夠有效溶解細胞膜組份，包括細胞質(zhì)膜、核膜和各種細胞器膜。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫共沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白，下游應(yīng)用范圍廣，提取液裂解細胞的能力較溫和，需要根據(jù)實際樣本情況優(yōu)化裂解時間。

本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于2D電泳，如下游實驗需要直接用于等電聚焦、雙向電泳，請使用我公司其他貨號的試劑盒。也可以將最后樣品除鹽后再用于2D電泳，用脫鹽柱脫鹽處理。

本試劑盒所配離心柱用來濾除顆粒較大的固體雜質(zhì)和固態(tài)脂肪雜質(zhì)，不能完全濾除液態(tài)脂滴，如果離心過濾后液面有脂肪層，需要用移液器移除液面的脂肪層。需要一次性完全濾除所有液態(tài)脂肪請選用我公司其他貨號的試劑盒。

產(chǎn)品特點：

● 使用方便，從細胞/組織提取蛋白不需經(jīng)過研磨、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理。

● 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。

● 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

● 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。

● 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含7 種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

試劑盒以外自備試劑和儀器：

● 移液器 ● 離心機 ● 渦旋混勻器 ● 振蕩器 ● PBS

高脂肪樣本蛋白提取試劑盒注意事項：

● 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。

● 實驗過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

● 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

● 可以根據(jù)自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

● Western 實驗內(nèi)參可以選用beta-actin、GAPDH、TubμLin。

使用方法：

細胞蛋白提取：

1、提取液制備：

每500μL冷的蛋白提取液中加入2μL 蛋白酶抑制劑混合物混勻后置冰上備用。

【注】：

● 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

● 加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

● 蛋白樣品用于測定某些細胞內(nèi)蛋白酶、磷酸酶活性等下游實驗時，注意根據(jù)實際情況調(diào)整抑制劑混合物是否加入。

2、取5-10×10⁶個細胞，在4℃，2000×g條件離心5-10分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細胞。

3、用冷 PBS洗滌細胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

4、每 5×10⁶個細胞中加入500μL冷的蛋白提取液，混勻后，在4℃條件下振蕩15-20分鐘。

【注】：

● 用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，保持液體稍微晃動即可。

● 沒有振蕩條件可以不振蕩，置4℃靜置即可，稍微延長時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻。

5、套上液體收集管，將提取液吸入蛋白離心管中，在4℃，10000×g條件下離心5分鐘。

【注】：

● 蛋白離心管適用于過濾除去不溶性大顆粒組織固體雜質(zhì)，固態(tài)脂肪等，如果是做脂肪含量低的細胞或無明顯固體不溶物時，可以不使用離心柱，直接將勻漿液離心即可。

● 提取液液面有脂滴時，可以用移液器小心吸除脂滴即可。

● 蛋白液里的微量脂肪需要直接過濾除去，可以使用我們的蛋白去脂肪柱。

● 離心前蛋白液會在重力作用下自然流穿離心柱，一定要先套上收集管再吸入蛋白液。

6、將液體收集管中的液體吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到蛋白樣品。

7、將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?

【注】：

● 建議用BCA法進行蛋白定量。

● 蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細菌污染。

組織蛋白提?。?

1、提取液制備：

每500μL蛋白提取液中加入2μL蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

【注】：

● 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

● 加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

2、取100mg-200mg組織樣本剪碎，加入500μL蛋白提取液，用組織勻漿器/勻漿機充分勻漿。

【注】：

● 如果組織樣品很細小，可剪碎后直接加入提取液振蕩15分鐘，可以不用勻漿器。

● 也可用液氮研磨的方法，常用操作即可。

3、將組織勻漿吸入一預(yù)冷的干凈離心管中，在4℃條件下振蕩15-30分鐘。

【注】：

● 用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，保持液體稍微晃動即可。

● 沒有振蕩條件可以不振蕩，置4℃靜置即可，稍微延長時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻。

4、套上液體收集管，將提取液吸入蛋白離心管中，在4℃，10000×g條件下離心5分鐘。

【注】：

● 蛋白離心管適用于過濾除去不溶性大顆粒組織固體雜質(zhì)，固態(tài)脂肪等，如果是做脂肪含量低的細胞或無明顯固體不溶物時，可以不使用離心柱，直接將勻漿液離心即可。

● 提取液液面有脂滴時，可以用移液器小心吸除脂滴即可。

● 蛋白液里的微量脂肪需要直接過濾除去，可以使用我們的蛋白去脂肪柱。

● 離心前蛋白液會在重力作用下自然流穿離心柱，一定要先套上收集管再吸入蛋白液。

5、將液體收集管中的液體吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，在4℃，10000×g條件下離心5分鐘。

6、將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到蛋白樣品。

7、將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?

【注】：

● 建議用BCA法進行蛋白定量。

● 蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細菌污染。

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